目的:本实验采用2,4,6-Trinitrobenzene sulfonic acid(TNBS)对SD大鼠进行灌肠造模,制备克罗恩病(CD,Crohn’s disease)大鼠模型,观察艾灸对克罗恩病大鼠干预疗效,应用16S r DNA技术与核磁共振氢谱(~1H NMR)技术检测艾灸对克罗恩病模型大鼠肠道菌群和结肠组织代谢物的影响,探讨与揭示艾灸治疗克罗恩病的作用机理。方法:40只SPF级雄性SD大鼠,适应性喂养一周后,分为正常组(10只)和模型组(30只)。参照Morris2,4,6-Trinitrobenzene sulfonic acid(TNBS)方法制备CD肠纤维化大鼠模型,验证模型后,原模型组大鼠随机分为模型组、艾灸组和西药组,每组10只。正常组不予以任何干预;模型组予以固定,不予治疗;艾灸组予以艾灸治疗,操作穴位选取“天枢穴”、“上巨虚穴”,每日治疗1次,每次治疗15分钟,共治疗7天;西药组予以美沙拉嗪灌胃,每日治疗1次,共治疗7天。1.观察各组大鼠一般行为变化、体重、粪便性状、疾病活动指数(DAI),肉眼及HE染色观察各组大鼠结肠组织病理变化。2.应用16S r DNA技术检测各组大鼠肠道菌群丰富度与多样性,观察艾灸干预后CD模型大鼠肠道菌群变化情况,通过LEf Se分析,找出艾灸干预后显著性差异菌群种类。3.应用核磁共振氢谱技术检测各组大鼠结肠组织代谢物变化。对核磁谱图进行归一化及可视化处理,结合PCA、PLS-DA等多变量统计方法对结肠组织做代谢模式、差异性代谢物分析,通过PLS-DA模型中VIP值结合T检验或ANOVA分析筛选大鼠结肠组织差异代谢物。通过生物功能分析,寻找相关代谢通路。结果:1.造模成功后,CD模型大鼠精神萎靡、懒动、食少、体重下降,可见松散便、稀便及血便,经过艾灸、美沙拉嗪干预治疗,艾灸组、西药组大鼠精神状态较前好转,体重较模型组增加(P﹤0.01),粪便性状,便血情况较模型组改善,DAI评分显著下降(P﹤0.01)。肉眼观察各组大鼠结肠形态组织:正常组大鼠结肠形态正常,光滑质软,颜色淡红,无充血水肿,肠壁厚薄适中;模型组大鼠肠壁形态不规则,充血红肿,肠壁扭曲,变形,增厚;结肠壁出现非连续性糜烂、坏死,裂隙状溃疡形成,黏膜呈现鹅卵石样改变。艾灸、西药组经治疗后结肠形态较模型组恢复,粘膜较模型组光滑,局部充血、水肿等现象改善,未见明显溃疡糜烂面。各组大鼠HE染色结果显示:正常组大鼠结肠组织层次清晰,腺体完整。模型组大鼠结肠组织层次模糊,结构混乱,腺体弯曲变形,大量炎性细胞浸润,杯状细胞减少,肉芽组织增生。经艾灸、美沙拉嗪治疗后肠粘膜结构较前完整,腺体结构有所恢复,少许炎性细胞浸润,较模型组明显改善。2.肠道菌群16S r DNA高通量测序结果:Alpha多样性结果表明艾灸能够调节CD模型大鼠肠道菌群丰富度与多样性。Beta多样性分析与ANOSIM相似性分析结果表明正常组、模型组、艾灸组、西药组组间肠道菌群结构差异明显。LEf Se分析结果表明艾灸可以较好的调节梭菌(Clostridium)、帕拉普氏菌属(Paraprevotella)、毛螺旋菌科(Lachnospiraceaeg)、颤螺菌属(Oscillospira)、疣微菌科(Ruminococcaceae)等菌群。3.结肠组织~1H NMR检测结果:模型组较正常组大鼠结肠组织代谢轮廓发生改变,涉及代谢物主要包括甲醇、甜菜碱、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、脯氨酸、次黄嘌呤、丙氨酸、乙酸盐、甘氨酸、缬氨酸、胆碱、肌酸、肌醇,其中甲醇、甜菜碱、胆碱、肌酸、肌醇浓度较正常组显著下降(P<0.05),亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸较正常组显著上升(P<0.05)。影响主要代谢物通路为牛磺酸、次牛磺酸代谢,丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢,精氨酸、脯氨酸代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,初级胆汁酸合成,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸合成等。CD模型大鼠经过艾灸干预后甜菜碱、胆碱、肌酸、肌醇、牛磺酸、亮氨酸、异亮氨酸、赖氨酸等代谢物显著回调,CD模型大鼠代谢紊乱状态一定程度恢复正常。结论:1.艾灸能较好改善TNBS诱导的CD模型大鼠一般状况、DAI评分及结肠组织病理变化。2.艾灸对CD模型大鼠肠道菌群丰富度与多样性具有一定调节作用,通过调节部分菌群促进肠上皮细胞再生,修复受损肠道黏膜;下调促炎因子,抑制肠道炎症反应;维持肠道免疫稳态等改善CD症状。3.艾灸通过回调部分代谢物,改善CD模型大鼠代谢紊乱状态,促进肠上皮细胞增殖与凋亡平衡,恢复肠道屏障完整性,调节固有与适应性免疫应答、缓解肠道氧化应激、减轻肠道氧化损伤等改善CD症状。