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目的:观察高糖处理的心肌成纤维细胞中miR-375的表达变化，以及抑制其表达后对胶原蛋白表达的影响。
方法:(1)用酶消化法分离、纯化、培养C57BL/6小鼠的原代心肌成纤维细胞。(2)用高糖处理第1-3代的心肌成纤维细胞，建立糖尿病细胞模型。(3)心肌成纤维细胞随机分成4组:A组，正常对照组;B组，高糖处理组;C组，高糖处理+miR-375抑制剂阴性对照组;D组，高糖处理+miR-375抑制剂组。(4)波形蛋白(Vimentin)免疫细胞化学染色法鉴定心肌成纤维细胞纯度。荧光实时定量PCR方法检测miR-375的差异性表达，荧光实时定量PCR方法检测miR-375抑制剂的转染效率，免疫细胞化学染色检测Ⅰ型胶原蛋白的表达水平，WesternBlot检测Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达水平。
结果:(1)用酶消化法可分离获得状态良好、纯度高的心肌成纤维细胞，培养的第3代心肌成纤维细胞纯度可达90％。(2)与正常对照组相比，高糖处理心肌成纤维细胞6，12，24h后，其miR-375的表达有增加趋势，且在6h增加最显著[6h组（54.95±4.1），12h组（28.84±2.5），24h组（18.77±2.22），P＜0.05]。(3)miR-375抑制剂瞬时转染高糖处理的心肌成纤维细胞，其转染效率达70％。(4)抑制miR-375的表达，显著降低高糖处理的心肌成纤维细胞内Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的表达。免疫细胞化学染色检测Ⅰ胶原蛋白表达水平:D组与C组相比，Ⅰ型胶原蛋白表达水平显著降低[（38.84％±3.34）vs（76.20％±6.96），P＜0.05]。WesternBlot检测各组心肌成纤维细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白表达水平:D组与B组、C组相比，Ⅰ型胶原蛋白表达水平明显降低[（0.46±0.05）vs（0.79±0.12），（0.46±0.05）vs（0.68±0.07），P＜0.05];Ⅲ型胶原蛋白表达水平显著降低[（0.24±0.03）vs（0.72±0.09），（0.24±0.03）vs(0.67±0.05),P＜0.05]。
结论:高糖处理后，C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞中miR-375的表达显著增加，特异性抑制其表达将显著降低Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白的表达，提示miR-375可能在糖尿病心肌纤维化中发挥重要的作用。