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研究目的:1.建立人类ERMAP基因荧光定量PCR检测方法,为人类ERMAP基因的进一步研究奠定方法学基础.2.通过研究人类ERMAP基因在不同细胞系,以及诱导K562细胞向红系和巨噬系细胞分化过程中,人类ERMAP基因表达量的变化,探讨其在造血活动中的作用.研究方法:1.人类ERMAP基因荧光定量PCR检测方法的建立 以含ERMAP cDNA的原核质粒pBluescript SK+为模板,设计上游引物(primerl:5-CATGTGACGGAGGTGGACAA-3)、下游引物(primer2:5-CAGCTTTATGGAGTTTTCCTTTTTCT-3)和荧光探针(FAM-CTTCTTTCAGACCATGCTA-MGB),设立荧光定量PCR反应体系并摸索反应条件,建立人类ERMAP基因荧光定量PCR检测方法.2.人类ERMAP基因在不同细胞系的表达选择血液肿瘤、实体瘤和正常组织细胞等三种类型的细胞系共15种,包括K562(慢性髓原白血病细胞系)、Jurkat(急性淋巴细胞白血病细胞系)、6T-CEM(T细胞白血病细胞系)、MEG-01(成巨核细胞白血病细胞系)、HEL(红细胞白血病细胞系)、HL-60(原髓细胞白血病细胞系)、MOLT-4(急性淋巴细胞白血病细胞系)、J-111(单核细胞白血病细胞系)、BEL1402(肝癌细胞系)、T-24(膀胱变形细胞癌细胞系)、SK-N-SH(神经母细胞瘤细胞系)、MG63(成骨肉瘤细胞系)、MCG803(人成纤维细胞系)、Ho-8910(卵巢癌细胞系)、ECV304(人脐静脉内皮细胞系),分别培养12h、24h、36h、48h、60h和72h,抽提RNA,反转录后用荧光定量PCR方法检测人类ERMAP的表达量.3.诱导K562细胞向红系和巨噬系分化过程中人类ERMAP基因表达量的变化规律分别以不同浓度Ara-C诱导K562细胞向红系方向分化,以TPA诱导K562向巨噬系方向分化,通过光学显微镜、电子显微镜观察细胞形态的变化,通过流式细胞仪检测细胞表面CD71、CD33,确定K562细胞向红系或巨噬系方向分化,同时用荧光定量PCR方法检测上述过程中人类ERMAP基因表达量的变化.结论:1.以含ERMAPcDNA的原核质粒pBluescript SK+为模板,建立检测人类ERMAP基因的荧光定量PCR方法,为进一步研究人类ERMAP基因奠定了方法学基础.2.该研究在国内外首次发现ECV304细胞表达人类ERMAP基因.3.K562细胞培养12及24小时,ERMAP表达阳性,而培养0、36、48、60、72小时,ERMAP表达均阴性.4.Ara-C可诱导K562细胞向红系方向分化,随着K562细胞向红系方向分化成熟,ERMAP基因表达量逐渐增多.5.TPA可诱导K562细胞向巨噬系方向分化,随着K562细胞向巨噬系方向分化成熟,ERMAP基因表达量无明显变化.上述结果提示:ERMAP基因与红系分化发育关系密切,其机理尚待进一步研究.