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家禽细菌感染性疾病防治中常需使用抗菌药物,而杀菌型抗菌药往往诱导革兰氏阴性菌释放内毒素。内毒素、抗菌药物均可诱发肝损伤,二者共同刺激致肝损伤的病理演变及护肝药保护作用与机理亟待探明。本研究首先建立恩诺沙星与内毒素联合诱发鸡肝损伤模型,并藉此研究其病理发生发展及复方甘草酸单胺可溶性粉的保护作用及机理。具体内容如下：1恩诺沙星联合LPS诱导新型鸡肝损伤模型的建立1.1恩诺沙星、LPS致肝损伤剂量的筛选海蓝蛋鸡分为恩诺沙星组(EⅠ～Ⅶ,n=10)分别以50,80,100,200,300,400,500mg/kg灌服,1次/d,连续3天；LPS组(LⅠ～Ⅶ,n=10)分别以1,2,4,6,8,10,15m1/kg腹注脂多糖粗提液(LPS)一次；空白组(n=10)以生理盐水代药物处理。给药后48h观察鸡精神状态、存活率,血清ALT、AST水平及肝组织病理学变化。结果,EⅣ～Ⅶ和LⅤ～Ⅶ组鸡出现死亡,EⅢ和LⅡ～Ⅳ组鸡精神不好,ALT、AST水平上升明显,EⅢ组肝细胞广泛肿大,部分坏死,LⅡ～Ⅳ组肝细胞坏死、胞浆空泡和炎性浸润明显,EⅠ、EⅡ和LⅠ组指标变化不及其他组明显,确定恩诺沙星剂量100mg/kg, LPS初筛剂量为2,4,6ml/kg。1.2恩诺沙星联合LPS致鸡肝损伤模型建立方法的确定连续3天灌服恩诺沙星(100mg/kg,1次/d),第三天ELⅠ～Ⅲ组灌胃同时按2,4,6ml/kg剂量腹腔注射LPS观察注射LPS后48h鸡存活率,血清ALT、AST、TP、ALB、GLB、A/G水平及肝组织病理学变化。结果：ELⅢ组鸡出现死亡,与较ELⅠ组比较,ELⅡ组鸡血清ALT、AST, GLB升高,TP、ALB、A/G降低及肝细胞病变更显著。确定ELⅡ组给药方式为鸡肝损伤建模方法,该模型肝细胞及功能受损明显,可用于研究家禽肝损伤机制和复方甘草酸单胺的护肝机理。2复方甘草酸单胺可溶性粉对恩诺沙星联合LPS致鸡肝损伤的保护机理研究2.1动物分组、建模、给药及采样动物分组：104羽海蓝蛋鸡随机分为空白组(Ⅰ)、模型组(Ⅱ)和复方甘草酸单胺预防组(Ⅲ)、治疗高(Ⅳ)、低(Ⅴ)剂量组。建模：除Ⅰ组外,其余各组按照以上确定方法建立肝损伤模型。给药：Ⅲ组在建模前三天以40mg/L混饮复方甘草酸单胺持续到建模结束；Ⅳ、V组分以22.5mg/kg、7.5mg/kg剂量灌服复方甘草酸单胺,2次/d,重复3天。建模后6h、24h、48h采血,部分血样分离血清,部分抗凝,采血后剖检肝脏。2.2复方甘草酸单胺可溶性粉对鸡肝功能保护作用全自动生化分析仪检测鸡血清中ALT、AST, TP、ALB、TBIL、DBIL、γ-GT,HE染色观察鸡肝组织病理学变化。结果Ⅱ组较Ⅰ组,在6h、24h和48h鸡血清中ALT、AST、γ-GT和TBIL水平显著升高,TP和ALB显著下降。与Ⅱ组相比：Ⅲ组鸡血清中ALT在6h,AST、γ-GT和TBIL在6h和24h显著降低,TP在6h,ALB在6h、24h和48h显著升高；Ⅳ组ALT、AST, γ-GT和TBIL水平在24h和48h显著降低,TP和ALB在24h和48h显著升高；V组各指标差异不显著。检测到DBIL在24h和48h显著升高,其余组差异不显著。组织病理学观察,Ⅳ组中较其他组肝细胞病变改善明显。表明复方甘草酸单胺粉对恩诺沙星联合LPS诱导肝损伤有一定的保护作用,效果受给药时机和剂量的影响。2.3复方甘草酸单胺可溶性粉的抗自由基损伤作用酶标仪检测血清中MDA、 NO、SOD和GSH含量。结果Ⅱ组较Ⅰ组,在6h、24h和48h鸡血清中MDA和NO水平均显著升高,SOD和GSH均显著下降。与Ⅱ组相比：Ⅲ组鸡血清中MDA和NO在6h和24h,MDA在48h显著降低,SOD在6h,GSH在6h、24h和48h显著升高；Ⅳ组MDA和NO水平在24h和48h均显著降低,SOD和GSH在24h和48h均显著升高；V组各指标差异均不显著。可见自由基损伤介导恩诺沙星联合LPS诱导鸡肝损伤过程,复方甘草酸单胺粉的保护作用可能依赖抗自由基损伤。2.4复方甘草酸单胺可溶性粉的免疫调节作用ELISA法检测鸡血清TNF-α、 IL-1、IL-6含量,流式细胞仪检测鸡外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞含量。结果发现Ⅱ组与Ⅰ组相比,鸡血清TNF-α、IL-1、IL-6含量在6h、24h和48h显著升高,CD3+、CD4+和CD8+细胞含量在6h、24h显著降低,48h显著升高。与Ⅱ组相比：Ⅲ组TNF-α和IL-6在6h显著降低,CD3+、CD4+和CD8T细胞在48h升高显著；Ⅳ组TNF-α、IL-6在24h和48h,IL-1和CD3+、CD4+和CD8+T细胞在48h显著降低,CD3+T细胞在6h、24h, CD4+和CD8+T细胞在24h显著升高；Ⅴ组中CD8+T细胞在48h显著降低.。结果显示恩诺沙星联合LPS可诱发炎性细胞因子释放和T细胞亚群紊乱,复方甘草酸单胺粉应能抑制炎性因子释放和双向调节鸡外周血T细胞亚群。