论文部分内容阅读
昆布,别名纶布、海昆布等,为海带科植物海带(Laminaria japonica Aresch.)或翅藻科植物昆布(Ecklonia kurome Okam.)、裙带菜(Forma distans Miyabe et Okam.)的干燥叶状体,是一种重要的药食同源植物,被《吴普本草》、《药性论》、《别录》、《本草纲目》、《本草拾遗》等医学典籍所收录,入胃、脾经,具有软坚,行水之功效,可用于瘰疬,瘿瘤,噎膈,水肿,睾丸肿痛,带下等症的治疗。随着现代仪器分析技术的进步与药理学的发展,已从海带、昆布、裙带菜等昆布药材中分离出多糖类、甘露醇,维生素,卤化物等多种具有良好活性的化合物。其中多糖类是最受关注的,如岩藻聚糖(fucoidan)、褐藻胶(alginate)和褐藻淀粉(1aminaran),国外学者对昆布多糖抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗菌、降血压、降血脂等活性进行了研究,发现其可以诱导骨髓型白血病细胞、胃癌细胞、HL260等肿瘤细胞的凋亡,而对正常细胞则无影响。为了提高多糖的利用率、降低工业生产成本,本研究以中国特色昆布资源(L. japonica Aresch.)为材料,对其酶法提取工艺、纯化工艺、降解工艺等进行了详细的研究,结果如下:(1)酶辅助法提取工艺研究对酶法提取多糖的工艺进行了单因素和复因素考察,发现木聚糖酶、木瓜蛋白酶、果胶酶和纤维素酶的最适pH值为5.0-6.0,最适酶解时间为3.0h;复合酶法提取昆布多糖的最佳工艺条件为:A1B2C2D2E1F1G1,即纤维素酶0.5%、木瓜蛋白酶1.0%、果胶酶1.0%、木聚糖酶1.0%、温度30.0℃、酶解时间3.0h、pH5.0,在此条件下多糖的提取率为78.9%,采用苯酚-硫酸法测定粗多糖中多糖含量,得其纯度为51.26%。(2)昆布多糖纯化工艺研究对多糖纯化工艺进行了研究,结果表明:蛋白酶-Sevag法是昆布多糖的最佳脱蛋白方法,其脱蛋白率为75.3%,多糖损失率为12.1%;H202氧化-A1203吸附多糖脱色法,最佳脱色率为62.4%,多糖损失率为36.1%,脱色后的多糖呈现淡黄色。(3)昆布多糖成分研究对昆布多糖用DEAE-纤维素柱进行了分离纯化,共得到3个昆布多糖样品,分别命名为LPS-1、LPS-2和LPS-3,收集到样品的质量分别为124mg、437mg和221mg,经过超离心法和比旋度测定后发现,只有LPS-2单一样品,同时推测其为海藻酸钠。(4)海藻酸钠降解工艺研究对酸法、碱法及氧化法降解海藻酸钠多糖的降解效率进行了考察,结果表明:酸法及碱法降解海藻酸钠能力有限,氧化降解多糖降解效率最高,为71.01%:并对氧化降解工艺进行了优化,发现其最佳氧化降解工艺为A1B1C1D2E2F2G2,即当过氧化氢浓度0.50mol/L、抗坏血酸浓度1.00mol/L和琥珀酸浓度1.00mol/L,温度为25℃,时间为4.00h,内外液相同、换液2次,为海藻酸钠氧化降解的最佳条件。(5)昆布多糖的衍生化研究以EDCI为缩合剂,分别使甲醇、苯甲醇、乙醇、丙二醇、正丁醇、苯酚与海藻酸及低聚糖进行酯化反应。(6)昆布多糖、低聚糖及其衍生物的抗肿瘤活性研究实验结果表明海藻酸钠对Hela细胞最为敏感,其IC50为197.83μg/mL;海藻酸钠低聚糖对H460细胞最为敏感,其IC50为192.71μg/mL;昆布多糖和海藻酸钠低聚糖对BXPC-3细胞均表现出较强的抑制作用,其IC50分别为8.70μg/mL和9.80μg/mL;海藻酸钠低聚糖正丁醇衍生物对H460细胞抗肿瘤活性较为显著,其IC50为59.03μg/mL;海藻酸钠低聚糖衍生物对Hela细胞和BXPC-3细胞均表现出较强的抑制作用。