论文部分内容阅读
紫马铃薯(Solanum tuberosum L.)起源于南美洲安第斯山脉地区,由于其块茎中富含酰化的花色苷,越来越多的研究者开始关注其在天然色素及保健功能方面的应用价值。本文采用高速逆流色谱(HSCCC)及制备液相色谱(Pre-HPLC)对紫马铃薯中的花色苷组分进行分离纯化,通过紫外-可见光谱及质谱对所得到的两种花色苷单体进行结构的初步鉴定;采用体外细胞试验研究了紫马铃薯花色苷粗提物及单体对3T3-L1前脂肪细胞增殖、周期、凋亡及分化方面的影响;最后通过大鼠体内试验探讨紫马铃薯花色苷粗提物的降脂减肥作用,为紫马铃薯天然色素的分离鉴定,功能性成分及产品的开发提供理论支持。主要研究结论如下:(1)采用高速逆流色谱(HSCCC)与制备液相色谱(Pre-HPLC)联用的方法从紫马铃薯肉花色苷提取物(AEPPF)中分离得到两种主要的花色苷。高速逆流色谱(HSCCC)以乙酸乙酯-正丁醇-水-三氟乙酸(1:3:5:0.1%, v/v)为溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相,流速2mL/min,进样量为100mg,初步分离得到40mg花色苷A(纯度56.4%)和11mg花色苷B(纯度45.6%)。接着利用制备液相色谱进一步纯化,得到10mg花色苷单体A(纯度97.8%)及3mg花色苷单体B(纯度97.7%)。花色苷结构通过紫外-可见光谱及质谱进行初步鉴定,推测花色苷A为矮牵牛色素-3-O-对香豆酰芸香糖苷-5-O-葡萄糖苷,花色苷B为芍药素-3-O-对香豆酰芸香糖苷-5-O-葡萄糖苷。(2)研究紫马铃薯花色苷提取物对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响。采用MTT法检测紫马铃薯肉和皮花色苷提取物(AEPPF, AEPPP)对细胞生长的抑制效果并确定半抑制浓度(IC50);采用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡情况;对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化,油红O染色比色分析AEPPF及AEPPP对其分化程度的影响。研究结果表明紫马铃薯花色苷提取物能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖且随浓度的增大抑制效果增强,AEPPF和AEPPP处理24h之后的IC50分别为92.0μg/mL和26.9μg/mL;能有效的诱导细胞凋亡,且对细胞的G2/M期产生阻滞作用;紫马铃薯花色苷提取物能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,减少细胞中脂质的沉积。20μg/mL、40μg/mL和80μg/mL的AEPPF处理组的细胞,其脂肪含量分别下降了16.1%、26.7%和29.6%,而20μg/mLAEPPP处理组的细胞,其脂肪含量下降了39.5%,与对照组相比,具有极显著性差异(p<0.01)。(3)采用大鼠体内试验进一步研究紫马铃薯花色苷提取物在减肥降脂方面的功能活性。将48只SD大鼠随机分为如下6组:普通对照组(control)、高脂饲料组(HF)、高脂饲料中添加低剂量紫马铃薯肉花色苷提取物组(1g/kg,1‰AEPPF)、高脂饲料中添加高剂量紫马铃薯肉花色苷提取物组(5g/kg,5‰AEPPF)、高脂饲料中添加低剂量紫马铃薯皮花色苷提取物组(0.5g/kg,0.5‰AEPPP)、高脂饲料中添加高剂量紫马铃薯皮花色苷提取物组(1g/kg,1‰AEPPP)。记录大鼠每日采食量和体重变化。研究发现,饲喂四周后,1‰AEPPF和5‰AEPPF组大鼠体重明显低于HF组(p<0.05),且添加花色苷各组大鼠的Lee’s指数均显著低于HF组。1‰AEPPF组大鼠肾周脂肪及附睾脂肪总重量明显低于HF组(p<0.05),5‰AEPPF、0.5‰AEPPP及1‰AEPPP组大鼠肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性相比HF组得到明显提高(p<0.05),此外添加花色苷各组大鼠血清胆固醇含量低于HF组,高密度脂蛋白含量高于HF组,但不具有显著性差异(p>0.05)。以上结果说明,紫马铃薯花色苷提取物具有提高大鼠体内抗氧化酶活性,降低大鼠体重,调节血脂的作用。