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该研究以青花菜(Brassica oleracea L.var.italica)为试验材料,探讨了影响离体再生的一系列因素,初步建立了青花菜高频的再生体系;在此基础上,探讨了影响转化的一些因素,建立了良好的转化体系,运用农杆菌介导法将OC Ⅰ基因成功转入青花菜;并对转基因植株进行了鉴定.结果如下:1青花菜高频再生体系的建立通过在MS附加NAA与6-BA不同浓度配比的培养基上,筛选出子叶和下胚轴适宜的激素配比NAA 0.2mg/L+6-BA 2mg/L和NAA 0.2mg/L+6-BA 1mg/L;子叶外植体不同切割方式接种试验表明:带柄子叶分化率要高于无柄、半切等形式的外植体;MSB作为基本培养基较MS有较高分化率;外植体插植的接种方式好于平放,更有利于再生;外植体取用4-5天龄无菌苗,从较高分化率和缩短再生周期角度考虑优于更长的苗龄;一定浓度(2.5mg/L)的AgNO3能明显促进下胚轴的再生,但对带柄子叶的分化效应不显著;分化率在不同基因型中有差异,子叶以正盐水分化率最高,下胚轴以万绿"分化率为高;再生芽插入MS+IBA 0.2 mg/L培养基,生根率达100%.2青花菜转化体系的研究青花菜对Kan比较敏感,表现在分化阶段10mg/LKan能抑制子叶和下胚轴分化不定芽,在生根阶段15mg/LKan能完全抑制根的生出.在脱菌抗生素的使用上,分化阶段宜用Cb,并逐步降低浓度,生根阶段宜用低浓度的Cef.外植体预培养2-3天,浸入用MS悬浮至O.D6000.2(下胚轴)或0.4(子叶)的农杆菌液中感染1min,无菌滤纸吸去多余菌液后,重接回原先的培养基黑暗中共培养3-4天,转入含Cb 500mg/L的脱菌培养基上进行脱菌7天(延迟筛选)处理,再转接到Kan 10mg/L和Cb 250mg/L的筛选培养基上对外植体进行多代筛选,每两周继代一次,淘汰未转化的白化芽、粉色芽和嵌合体,获得具Kan抗性的绿色芽.正常绿芽进行扩繁,一部分插入含Kan 15mg/L生根培养基继续筛选,一部分用于检测,其余部分扩繁或离体保存.3转基因植株的鉴定提取Kan抗性植株的总DNA,进行PCR扩增,结果显示转化植株扩增出目的带,初步表明目的基因OC Ⅰ已经转入青花菜中.