长白山三种桑黄比较研究

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桑黄是一类具有重要药用价值的多年生大型真菌,因寄生于桑树而得名。多糖和黄酮是桑黄中两种重要的活性成分,因其具有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、抑菌等生物活性而受到广泛关注。本文以长白山三种桑黄子实体为材料,分别对三种桑黄的多糖及黄酮最佳提取工艺进行了研究,并通过抗氧化实验及抑菌实验分析了三种桑黄抗氧化及抑菌能力的差异,最后,通过HPLC对三种桑黄黄酮类成分进行了中药指纹分析。主要结果如下:1.使用超声波辅助热水浸提法提取桑黄多糖,通过单因素实验及正交分析确定了三种桑黄多糖最佳提取工艺。杨树桑黄最佳提取工艺为:料液比1:40,提取时间5 h,提取温度100℃,在此条件下,多糖含量为7.51 mg/g;松树桑黄最佳提取工艺为:料液比1:60,提取时间5 h,提取温度80℃,在此条件下,多糖含量为7.40 mg/g;丁香桑黄最佳提取工艺为:料液比1:60,提取时间4 h,提取温度100℃,在此条件下,多糖含量为4.86 mg/g。三种桑黄按多糖含量从高到低顺序为杨树桑黄,松树桑黄,丁香桑黄。2.使用超声波辅助乙醇提取法提取桑黄总黄酮,通过单因素实验及响应面分析确定了三种桑黄总黄酮最佳提取工艺,杨树桑黄最佳提取工艺为:料液比1:32,乙醇浓度62%,超声温度72℃,在此条件下,总黄酮含量为(11.489±0.153)mg/g。松树桑黄最佳提取工艺为:料液比1:33,乙醇浓度70%,超声温度64℃,在此条件下,总黄酮含量为(4.327±0.192)mg/g。丁香桑黄最佳提取工艺为:料液比1:70,乙醇浓度65%,超声温度73℃,在此条件下,总黄酮含量为(1.419±0.093)mg/g。三种桑黄按总黄酮含量从高到低顺序为杨树桑黄,松树桑黄,丁香桑黄。3.对三种桑黄多糖抗氧化性活性研究的结果表明:相同浓度下,杨树桑黄多糖的总还原力最高,其次是丁香桑黄多糖,最后是松树桑黄多糖。三种桑黄多糖的羟基自由基清除能力由大到小分别为杨树桑黄多糖、松树桑黄多糖、丁香桑黄多糖。三种桑黄多糖对超氧阴离子自由基清除研究表明,在100-200μg/mL的浓度范围内,杨树桑黄多糖清除率高于丁香桑黄多糖,松树桑黄多糖清除率最低。浓度在200μg/mL以后,清除率大小顺序:丁香桑黄多糖>杨树桑黄多糖>松树桑黄多糖。三种桑黄多糖对DPPH及ABTS自由基清除能力由大到小顺序:杨树桑黄多糖>丁香桑黄多糖>松树桑黄多糖。由此可见,杨树桑黄多糖的抗氧化效果最好,丁香桑黄多糖次之,松树桑黄最次。比较了三种桑黄总黄酮的抗氧化性活性,结果表明:三种桑黄总黄酮的总还原力由大到小为杨树桑黄总黄酮,松树桑黄总黄酮,丁香桑黄总黄酮。三种桑黄总黄酮的羟基自由基清除能力由大到小分别为松树桑黄总黄酮>杨树桑黄总黄酮>丁香桑黄总黄酮。三种桑黄总黄酮超氧阴离子自由基清除能力由大到小分别为杨树桑黄总黄酮>丁香桑黄总黄酮>松树桑黄总黄酮。三种桑黄总黄酮对DPPH及ABTS自由基清除能力由大到小顺序为杨树桑黄总黄酮>松树桑黄总黄酮>丁香桑黄总黄酮。三种桑黄总黄酮对黄嘌呤氧化酶活性抑制大小顺序为松树桑黄总黄酮>丁香桑黄总黄酮>杨树桑黄总黄酮。由此可见,杨树桑黄总黄酮的抗氧化效果最好,其次是松树桑黄总黄酮,最后为丁香桑黄总黄酮。三种桑黄多糖及总黄酮抑菌活性分析结果显示,三种桑黄多糖及总黄酮对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌都有一定的抑菌效果,对于白色念珠菌无明显抑制效果。4.通过对三种桑黄总黄酮进行HPLC分析,比较了不同分离方法及不同种桑黄总黄酮组成的共性及差异。结果显示,杨树桑黄中含有芦丁、圣草酚、槲皮素、柚皮素、芹菜素。松树桑黄中含有芦丁、圣草酚、槲皮素、柚皮素、樱花亭。丁香桑黄中都含有芦丁、圣草酚、柚皮素、芹菜素。相似度分析,杨树桑黄、松树桑黄、丁香桑黄与对照图谱的相似度分别为0.545,0.821,0.835,松树桑黄和丁香桑黄聚为一类,与杨树桑黄分离。通过对三种桑黄进行主成分分析,确定影响三种桑黄差异的几种化合物,其中最主要的为保留时间为11.291、17.416、38.827、65.168的化合物,其中保留时间为38.827的化合物为柚皮素。
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