多年生黑麦草和结缕草组织培养体系和农杆菌介导的抗草甘膦转化体系的研究

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本文研究分析鉴定了25种现有多年生黑麦草(Lolium perenne L.)种质资源的抗干旱、耐盐碱等抗逆性,筛选出优良品系;建立了多年生黑麦草和中华结缕草(Zoysia sinica Hance)生物技术育种平台,发展农杆菌介导的转基因技术.在获得优良种质资源的基础上,利用建立的生物技术平台,进行抗草甘膦黑麦草和结缕草新品种培育.1.多年生黑麦草种质资源的抗旱耐盐性的筛选本文针对多年生黑麦草萌发和幼苗时期对盐分最敏感的特点,对25个多年生黑麦草品种进行不同盐胁迫下萌发特性的研究,测定其发芽率、发芽势、相对盐害率、幼苗高度.2.多年生黑麦草和结缕草组织培养再生体系的建立和优化对15个多年生黑麦草品种进行了愈伤组织诱导和再生体系的研究.不同黑麦草品种的愈伤诱导各不同,首相、春潮、旋风和百客来的愈伤诱导率达到20﹪以上,而球道、APM和凯蒂莎的出愈率在11﹪左右.与CC、NB基本培养基相比,最适培养基是MS培养基;愈伤诱导最适宜的植物激素2,4-D浓度为5mg/L;在愈伤诱导和继代培养基中添加0.05mg/L6-BAP和2m/L ABA有利于改善愈伤组织的质量,提高愈伤分化率;不同时期愈伤组织的分化率有差异,继代2-3个月的胚性愈伤组织是较好的转化受体;凯蒂沙、春潮、APM、百尼牡的分化率较高,依次为32.94﹪、30﹪、38.37﹪和26.02﹪,百宝的分化率较低,为14.85﹪.植物凝胶(phytagel)与国产琼脂相比是更好的固化剂,有利于提高愈伤组织数量和质量,增加愈伤的分化率.建立了黑麦草抗性愈伤组织的筛选方案.研究了结缕草的愈伤组织诱导和再生体系.3.多年生黑麦草和结缕草农杆菌转化体系的建立和抗草甘膦转化体的获得本研究中,用农杆菌LBA4404/pCAMBIA1301和LBA4404/pBI121转化多年生黑麦草的和平、百宝和旋风品种,检测GUS的瞬时表达,
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