链霉菌Act12是一株具有多种活性的放线菌,研究表明其具有良好的生物学活性,如促进草莓生长,提高丹参毛状根中丹参酮的产量等。然而,前期的代谢产物分析表明,发酵液中含有的代谢产物种类和数量较少,全基因组测序后发现基因组中含有丰富的生物合成基因簇,表明Act12中基因簇大多为沉默基因簇,或低表达基因簇。为了研究它的促生机制,文章第一部分,探究该菌在实验室条件下能够产生的代谢产物。首先通过发酵条件探索,寻找到Act12发酵的最适条件,然后进行大量发酵,通过对发酵浸膏中的主要化合物进行多种方法的分离纯化,得到三个化合物,并对三个化合物进行了核磁,质谱检测,三个化合物结构正在鉴定中。Act12中基因簇大多为沉默基因簇,或低表达基因簇,为发现新的活性化合物提供了基因资源。为此我们分析和研究密旋链霉菌(Streptomyce spactum)Act12含卤代酶基因簇的功能,该基因簇中含有编码一个Lux R家族调控因子。文章第二部分通过同源重组双交换的方法对该基因进行敲除,分析突变株的代谢产物变化,从而初步了解该基因的功能。本文成功构建包含目的基因左右臂和卡那霉素抗性标记的重组质粒pKCJ17(pKC1139-spa5613::kan),通过接合转移转入Act12中,筛选得到spa5613基因阻断突变株。其次,将突变株在不同培养基中发酵后,用有机试剂萃取获得粗提物。最后用萃取粗提物进行生物活性拮抗实验和HPLC检测,结果表明,与野生型相比,突变株的代谢产物种类增加,且突变株对部分病原真菌的活性增强。spa5613基因的敲除和遗传互补实验表明spa5613为负调控基因,可能具有多效作用。这为研究密旋链霉菌的次级代谢调控以及通过敲除潜在的负调控基因激活沉默基因簇提供了借鉴。