水动力转染法快速建立丙肝感染相关分子LDLR、CD81、Sip-L转基因小鼠模型

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丙肝研究一直受缺乏动物模型困扰,病毒与细胞表面分子结合是病毒感染的前提,近年来陆续发现一些能介导HCV感染的细胞表面分子,其中最主要的有低密度脂蛋白受体LDLR、CD81和浸入诱导蛋白样因子Sip-L等,研究还发现这些分子在人和小鼠之间只有80-90%的同源性。因此,能否通过将人的HCV易感分子基因导入小鼠体内并使其稳定表达,以建立HCV的小鼠感染模型,需要进行研究。目前体内基因转染的方法主要有显微注射、基因枪、电穿孔、逆转录病毒携带、脂质体转染等方法。这些方法虽在一定程度上能引起基因的表达,但都较复杂、不易操作、代价高昂。近来一种简单、易操作且安全有效的基因转染方法——水动力转染法(hydrodynamicbasedtransfection)正被广大研究者认识、应用。 我们首先采用水动力转染方法转染了带绿色荧光蛋白报告基因质粒载体并检测到肝细胞中报告基因的表达,由此建立了水动力转染的技术平台。在此基础上,我们将人丙肝易感分子LDLR、CD81、Sip-L克隆至真核表达载体pEGFP-C1上,水动力方法转染24h后在肝细胞中亦检测到基因产物。本实验成功构建了这三种分子的真核表达质粒,并验证了水动力转染方法的有效性,为进一步建立小鼠丙肝感染模型打下了基础。
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