【摘 要】
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目的:探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白3（tumor necrosis factor alpha induced protein 3,TNFAIP3）在胶质瘤中的表达及其对人脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移等生物学功能的影响。方法:1、使用癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库分析TNFAIP3在胶质母细胞瘤（glioblastoma,GBM）、低级别的胶质瘤
【基金项目】
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安徽省自然科学基金（1908085QH334）; 蚌埠医学院研究生科研创新计划项目（Byycx20033）
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目的:探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白3（tumor necrosis factor alpha induced protein 3,TNFAIP3）在胶质瘤中的表达及其对人脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移等生物学功能的影响。方法:1、使用癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库分析TNFAIP3在胶质母细胞瘤（glioblastoma,GBM）、低级别的胶质瘤（low grade glioma,LGG）和正常脑组织中的表达情况;通过生存分析进一步研究胶质瘤患者中TNFAIP3不同表达情况与预后的关系。2、采用实时荧光定量法（q RT-PCR）和蛋白质印迹法（WB）分别检测人星形胶质细胞NHA和胶质瘤细胞株U87、U251、SNB19、T98和LN229中TNFAIP3mRNA和蛋白的表达,以TNFAIP3高表达的U87和SNB19作为后续实验对象。3、使用阳离子脂质体Lipofectamine 2000介导小干扰RNA（si RNA）来转染U87和SNB19以下调TNFAIP3 mRNA和蛋白质的表达,实验分成3组:空白对照组（Blank组）、阴性对照组（si-NC组）和实验组（si-TNFAIP3组）,采用倒置荧光显微镜定性观察转染效果和q RT-PCR法定量检测每组细胞转染后TNFAIP3的表达量。4、采用CCK-8法检测下调TNFAIP3表达对U87及SNB19细胞增殖的影响;采用流式实验检测下调TNFAIP3表达对U87及SNB19细胞凋亡的影响;采用Transwell小室检测下调TNFAIP3表达对U87及SNB19细胞侵袭的影响;运用细胞划痕实验检测下调TNFAIP3表达对U87及SNB19细胞迁移的影响。5、通过慢病毒转染U87来构建稳定表达细胞株,实验分成2组:阴性对照组（U87-si-NC组）和实验组（U87-si-TNFAIP3组）,把转染后的细胞分别接种到裸鼠皮下,定期观察并测量肿瘤大小和重量;36天后取出肿瘤进行石蜡包埋并制作成切片,通过免疫组化实验来检测增殖指数Ki-67的表达量。结果:TNFAIP3在GBM和LGG中均为高表达,且TNFAIP3高表达与生存时间的缩短密切相关（P＜0.05）;和NHA相比,TNFAIP3在U87、U251、SNB19、T98、LN229中的表达水平均显著升高（P＜0.05）;Lipofectamine 2000介导si-TNFAIP3转染U87及SNB19细胞可下调TNFAIP3的表达;下调TNFAIP3表达可抑制U87及SNB19细胞的增殖、促进凋亡（均P＜0.05）;下调TNFAIP3表达可抑制U87及SNB19细胞的侵袭和迁移能力（均P＜0.05）;下调TNFAIP3表达可抑制U87细胞在裸鼠体内成瘤并抑制Ki-67的表达。结论:TNFAIP3在胶质瘤中呈现高表达状态;TNFAIP3的表达可促进U87及SNB19细胞的增殖、侵袭和迁移,抑制凋亡;si-TNFAIP3可抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,促进凋亡;下调TNFAIP3表达可抑制U87细胞在裸鼠体内的生长和增殖。
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