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目的:重金属铬污染已经成为职业接触人群肺癌的主要诱因,近年来随着空气污染的加重,由铬污染引起的非职业人群肺癌的比例也逐年在增加。探究铬污染致肺癌的机制迫在眉睫。HnRNP A2/B1作为RNA结合蛋白,参与RNA的转录调节、前体mRNA剪接、mRNA降解等过程。目前人们发现,在肺癌组织中hnRNP A2/B1异常高表达,临床上已经将hnRNP A2/B1作为肺癌检测以及预后判断的辅助手段。我们在前期研究中也发现hnRNP A2/B1高表达也是铬体外诱导细胞恶性转化中的高概率事件。因而利用细胞模型研究hnRNP A2/B1在铬诱导细胞恶性转化中的作用对肺癌的理论和临床研究都很有价值。本文主要研究:(1)以人正常肺上皮细胞BEAS-2B为对象,模拟人体Cr(Ⅳ)环境暴露,建立Cr(Ⅳ)导致恶性转化的肺癌体外模型,并挑选出hnRNP A2/B1高表达株,命名为BEAS-2B-Cr-HN;(2)在BEAS-2B-Cr-HN细胞中hnRNP A2/B1能否通过AKT影响下游MMP-9蛋白;(3)在BEAS-2B-Cr-HN细胞中hnRNP A2/B1能否通过AKT信号通路影响细胞的迁移、侵袭;(4)芹菜素能否抑制hnRNP A2/B1的异常高表达并对铬诱导的恶性转化起到化学预防的作用;(5)芹菜素能否通过hnRNP A2/B抑制BEAS-2B-Cr-HN细胞的迁移侵袭。以此来阐明hnRNP A2/B1在肺癌发生发展过程中扮演的角色及作用机制,为临床肺癌的预防、治疗以及预后检测提供理论基础。方法:(1)Transwell,Western Blot实验鉴定诱导6个月的BEAS-2B细胞的迁移侵袭能力及相关蛋白表达;(2)用软琼脂克隆实验鉴定BEAS-2B-Cr细胞恶性转化能力;(3)用异体移植瘤实验验证恶转细胞成瘤能力;(4)用BEAS-2B-Cr-HN细胞株进行基因敲减以及过表达,Western Blot检测AKT及下游蛋白MMP-9等迁移、侵袭相关蛋白的变化;(5)用BEAS-2B-Cr-HN细胞株进行基因敲减以及过表达,transwell实验检测迁移、侵袭能力的改变情况;(6)HnRNP A2/B1过表达质粒以及AKT敲减质粒进行共转染,探究在BEAS-2B-Cr细胞中hnRNP A2/B1/AKT/MMP-9信号通路的可能性;(7)Western Blot检测芹菜素对BEAS-2B-Cr-HN细胞株中hnRNP A2/B1的作用;(8)Transwell实验检测芹菜素对BEAS-2B-Cr-HN细胞迁移、侵袭能力的影响。结果:(1)在一定浓度范围内,BEAS-2B-Cr细胞中hnRNP A2/B1以及迁移、侵袭相关蛋白随着Cr(Ⅳ)浓度的升高而升高;(2)相比于正常BEAS-2B细胞,BEAS-2B-Cr细胞迁移、侵袭能力提高;(3)随着Cr(Ⅳ)浓度的升高软琼脂中生长出的BEAS-2B-Cr细胞I集落变大变多;(4)挑取软琼脂中长出的BEAS-2B-Cr细胞克隆,分别扩大培养后注射到裸鼠皮下可以形成肿瘤;(5)随着hnRNP A2/B1升高/降低,AKT及下游蛋白MMP-9以及迁移侵袭相关蛋白如FAK、c-Src产生明显变化;(6)HnRNP A2/B1通过调节AKT调控下游MMP-9;(7)芹菜素可以降低BEAS-2B-Cr-HN细胞中hnRNP A2/B1的表达;(8)芹菜素可以减弱BEAS-2B-Cr-HN细胞的迁移、侵袭能力。结论:(1)Cr(Ⅳ)诱导BEAS-2B细胞恶性转化模型成功建立,可用于Cr(Ⅳ)长期暴露致肺癌的体外研究;(2)在BEAS-2B-Cr-HN细胞株中hnRNP A2/B1通过AKT调控MMP-9,从而调控细胞的迁移和侵袭;(3)芹菜素可以降低BEAS-2B-Cr-HN细胞中hnRNP A2/B1的表达,从而减弱BEAS-2B-Cr-HN细胞的迁移、侵袭。希望我们的发现能为肺癌的预防提供新的思路。