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目的:研究不同眼压的兔急性高眼压模型中,视神经轴浆运输及细胞骨架的改变情况。
方法:成年新西兰大白兔24只,分成4组(20mmHg组,30mmHg组,40mmHg组,对照组),每组6只。每只兔我们均行动脉插管来监测血压及动脉氧分压,静脉插管来维持持续麻醉状态及调整血压,气管插管来维持通气量,以此来建立兔稳定的生理状态。随后对于每只兔的左眼采用前房穿刺灌注法联合压力持续监测法,通过压力监测设备(包括压力换能器、生物信号处理系统、输出设备)的应用,制造精确、稳定、持续的急性高眼压模型。在建立了稳定的高眼压模型后,开始对于轴浆运输及细胞骨架进行相关研究。实验开始时,在兔眼的玻璃体腔中注射Rhodamine-b-isothiocyanate(RITC)用以观察轴浆运输。持续3小时高眼压后,过量麻醉处死兔后,迅速取下眼球,使视神经保持在4-6mm,连同筛板、乳头前视网膜取下视神经。通过NFHp、NFH、NFM等细胞骨架蛋白的免疫组化染色用以研究细胞骨架的改变。应用荧光显微镜及共聚焦显微镜对视神经轴浆运输及细胞骨架的形态改变进行观察。最后通过灰度分析及SPSS11.5软件统计两部分改变的情况以及两者和眼压的关系。
结果:通过压力监测设备的应用,各眼压值均能精确稳定地维持在预先设定的眼压值范围内。40mmHg组:40.4965±0.703458mmng、30mmHg组:31.01522±0.920309mmHg、20mmHg组:20.52157±0.412226mmHg、对照组:11.91016±1.671357mmHg。
通过持续监测及适时补液,血压平均维持在52～78mmHg,脉压差26mmHg。
视神经轴浆运输染色结果:红色的RITC染料在视神经中心呈顺行标染,但随着离视网膜的距离越远,红色标记越淡。不同眼压组别中,其轴浆运输受障碍的情况不同。随着眼压升高,其轴浆运输能力减弱(P＜0.05)。筛板不同部位中,各眼压组别的轴浆运输受障碍情况不同。筛板前区,各眼压组间无差别(P＞0.05),筛板区,各眼压组间有差异,30mmHg组及40mmHg组与对照组有显著性差异(P＜0.05),20mmHg组与对照组无差异(P＞0.05)。筛板后350μm,30mmHg组及40mmHg组与对照组有显著性差异(P＜0.05),20mmHg组与对照组无差异(P＞0.05)。
视神经细胞骨架研究结果:NFH组中,不同眼压组别中神经丝染色不同。40mmHg组呈现明显的低荧光,30mmHg组中心部分神经丝缺失,20mmHg组与对照组在荧光及神经丝数量上无明显差异。NFM及NFHp组呈现相同结果。通过灰度比值(高眼压灰度/对照组灰度),经One-way ANOVA统计后,发现各神经丝蛋白组,各眼压组别之间,并无显著的统计学意义。
结论:30mmHg以上的兔高眼压模型持续3小时将导致视神经轴浆运输的改变,且轴浆运输的障碍部位以筛板区和筛板后区350μm区域为主。而30mmHg及40mmHg高眼压持续3小时所致的细胞骨架改变并不明显。30mmHg及40mmHg的兔高眼压持续3小时所致的轴浆运输障碍早于细胞骨架的改变。