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【目的】HCC(Hepatocellular carcinoma,肝细胞癌)是恶性程度较高的肿瘤之一,肝肿瘤细胞增殖快并有肿瘤转移和药物抗性。研究表明HSC(Hepatic stellate cell,肝星状细胞)表达的YAP1(Yes-associated protein 1,Yes相关蛋白1)参与了HCC的肿瘤发生和增殖转移。同样由HSC表达的SPARC(Secreted protein acidic and rich in cysteine,富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白)与HCC的肿瘤增殖有关。因此,我们开展实验研究肝癌细胞活化的肝星状细胞(Activated hepatic stellate cell,a HSC)能否通过上调YAP1和SPARC的表达,促进肝癌细胞的侵袭迁移。【方法】培养人肝星状细胞LX-2和人肝癌细胞Hep G2细胞系,分别制备LX-2-CM(LX-2-Conditioned Medium,LX-2条件培养基)和Hep G2-CM(Hep G2-Conditioned Medium,Hep G2条件培养基)。使用Hep G2-CM培养LX-2,制备活化的LX-2-CM,用后者培养Hep G2细胞,以未经过Hep G2-CM培养的LX-2制备的LX-2-CM培养的Hep G2细胞为对照,通过细胞划痕实验和Transwell细胞侵袭实验研究活化的HSC对HCC侵袭转移的作用。使用Hep G2-CM培养LX-2细胞获得活化的实验组LX-2细胞,以LX-2-CM和NSM(Non-serum medium,无血清培养基)培养的LX-2细胞为对照,通过RT-q PCR分别研究a HSC和静息状态肝星状细胞(Quiescent hepatic stellate cell,q HSC)中YAP1和SPARC m RNA表达水平改变,并用α-SMA(α-Smooth muscle actin,α-平滑肌蛋白)水平验证HSC的活化水平。进行LX-2和Hep G2细胞的共培养,以单独培养和不接种细胞作为对照,通过RT-q PCR检测a HSC和q HSC中YAP1与SPARC的m RNA表达水平,并用α-SMA水平验证HSC的活化水平。用Hep G2-CM培养LX-2细胞,以LX-2-CM培养的LX-2细胞作为对照,通过Western Blotting实验探究YAP1和SPARC蛋白表达水平,并用α-SMA水平验证HSC的活化水平。【结果】细胞划痕实验结果显示,实验组活化的LX-2-CM培养的Hep G2细胞表现出相对于对照组(P<0.001)和空白组(P<0.001)更明显的侵袭迁移现象,差异有统计学意义。Transwell细胞侵袭实验结果显示,实验组活化的LX-2-CM培养的Hep G2细胞表现出相对于对照组(P=0.0036)和空白组(P=0.0017)更明显的侵袭迁移现象,差异有统计学意义。这说明HCC活化的HSC促进了HCC的侵袭转移。RT-q PCR结果显示,相对于静息状态的LX-2细胞(LX-2-CM培养),Hep G2-CM活化的实验组LX-2细胞YAP1(P<0.0001)、SPARC(P=0.0003)和α-SMA(P<0.0001)的m RNA表达水平均更高,差异有统计学意义。相对于NSM培养的静息状态LX-2细胞,Hep G2-CM活化的实验组LX-2细胞YAP1(P=0.001)、SPARC(P=0.0204)和α-SMA(P<0.0001)的m RNA表达水平均更高,差异有统计学意义。这说明HCC活化的HSC细胞在m RNA水平上高表达YAP1和SPARC。相对于与LX-2共培养的对照组,与Hep G2共培养活化的LX-2细胞YAP1(P=0.0023)、SPARC(P=0.1284)和α-SMA(P<0.0001)的m RNA表达水平更高,部分差异有统计学意义。相对于和NSM共培养的对照组,与Hep G2共培养获得活化的LX-2细胞YAP1(P=0.0224)、SPARC(P=0.0987)、α-SMA(P=0.0007)的m RNA表达水平更高,部分差异有统计学意义。这说明HCC活化的HSC细胞在m RNA水平上高表达YAP1。Western Blotting结果显示,相对于LX-2-CM培养的静息状态下的LX-2细胞,Hep G2-CM活化的实验组LX-2细胞中YAP1和SPARC的蛋白表达水平更高。这说明了在HCC活化的HSC细胞在蛋白水平上高表达YAP1和SPARC。【结论】人肝癌细胞活化的肝星状细胞通过上调YAP1和SPARC表达促进人肝癌细胞侵袭转移。