亲水性1,8-萘酰亚胺类氢离子荧光探针的合成及其在活细胞成像中的应用

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以1,8-萘酐和脂肪胺为原料合成了四种氢离子荧光探针:4-((2’-N,N-二甲基氨基)乙基)氨基-N-正丁基-1,8-萘酰亚胺(MBN)、4-((2’-N,N-二乙基氨基)乙基)氨基-N-正丁基-1,8-萘酰亚胺(EBN)、4-((2’-N,N-二甲基氨基)乙基)氨基-N-(2’-N,N-二甲基氨基)乙基-1,8-萘酰亚胺(MMN)、4-((2’-N,N-二乙基氨基)乙基)氨基-N-(2’-N,N-二乙基氨基)乙基-1,8-萘酰亚胺(EEN)。通过红外光谱、核磁共振、质谱、元素分析表征了其结构。MBN、EBN、MMN、EEN有较好的亲水性和热稳定性,其pKa值分别为8.50,9.02,8.50,8.96。5.0*10-5 mol/L的MBN和EBN乙醇水(V:V=1:19)溶液的最大吸收波长(摩尔消光系数)分别为:438 nm(1.29 M-1·cm-1)和436 nm(1.32 M-1·cm-1),最大荧光波长(荧光量子产率)分别为:529 nm(0.599)和529 nm(0.759);5.0*10-5 mol/L的MMN和EEN水溶液的最大吸收波长(摩尔消光系数)分别为:444 nm(1.60 M-1·cm-1)和444 nm(1.36 M-1·cm-1),最大荧光波长(荧光量子产率)分别为:534 nm(0.558)和536 nm(0.647)。MBN、EBN、MMN、EEN能在Britton-Robinson缓冲溶液中高选择性识别H+,而Na+, K+ (200倍)、Mg2+, Ca2+ (100倍)、Cr3+, Mn2+, Fe3+, Fe2+, Co2+, Ni2+, Cu2+, Zn2+, Cd2+, Hg2+, Pb2+ (10倍)、Cl- (560倍), PO43- (800倍)、SO42- (10倍)、NO3- (60倍)无显著影响。结合质子后,MBN、EBN、MMN和EEN荧光分别可增强12.9、11.8、13.6、25.6倍。EEN可以用于活细胞成像,随着细胞外pH值从5.51增大到7.55,进入细胞内结合质子的EEN分子逐渐增多,细胞荧光逐渐增强。
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