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[研究背景]肿瘤发病是一个逐步演变的过程,细胞通过一系列进行性的改变而向恶性发展。随着分子生物学的飞跃发展,肿瘤的研究也进入了分子与基因水平,为许多肿瘤的早期诊断、早期治疗及基因治疗提供新的靶点,提高了患者的生存时间和生存质量。肺癌的发病率和病死率是恶性肿瘤中最高的,约占所有肿瘤的12.4%,生存质量也非常差,5年生存率低于15%。但肺癌的早期诊断、早期治疗一直临床医生面临的难题,据宋志明报道80%的肺癌患者明确诊断时已到了晚期,失去手术治疗的机会。有报道RyR1基因与多种肿瘤相关,提示RyR1基因与肿瘤细胞的增值凋亡有关。本实验采用荧光定量PCR的方法对RyR1基因进行研究,以探讨RyR1基因与肺癌的关系。兰尼碱受体1基因(ryanodine receptor type1,RyR1)编码的是一种高分子量四聚体钙离子通道蛋白,该蛋白受多种生理因素和药物制剂变构调节,在脊椎动物中发现有3个亚(RyR1-3)。各RyR亚型表现出不同钙敏感性,并有组织分布特异性：RyR1型主要在骨骼肌,分布于肌细胞的终末池肌浆网膜上,在钙离子信号的产生及肌细胞兴奋收缩中起关键性的作用；RyR2型分布在心脏,RyR3型分布在大脑和神经组织。兰尼碱受体1受激动剂和抑制剂的调节从而引起钙离子浓度的改变,进而引发钙离子信号,这种信号的改变在肌细胞中的作用是使骨骼肌功能障碍。钙离子信号的改变在非兴奋性细胞中可引起细胞分化、增殖与凋亡的相应改变。研究报道提示RyR1基因与多种肿瘤细胞的增值凋亡有关。而RyR1基因在肺癌方面研究较少,本实验希望为肺癌的早期诊断提供新思路。[目的]探讨RyR1基因与肺癌的关系,RyR1mRNA表达水平与肺癌患者的性别、年龄、临床分期、病理类型以及预后的关系。[方法]实验采用荧光定量PCR的方法对113例非小细胞肺癌、55例癌旁正常组织和30例肺良性肿瘤组织中RyR1mRNA的表达水平进行检测。统计软件用SPSS13.0;两样本均数比较用t检验,多样本均数的两两比较用LSD-t检验。用ROC曲线和excel计算最佳诊断界值,并以该值界定肺癌患者的RyR1基因阴性或阳性；用Kaplan-Meier法作生存曲线及生存时间的比较；多因素分析用Cox回归模型。[结果](1)肺癌组织RyR1mRNA表达水平的均数及标准差为0.2599±0.0562；肺良性肿瘤组织为0.2070±0.0455；肺癌旁正常组织为0.2242±0.0511。三组均数的统计分析比较差异有统计学意义(F=15.915,P=0.000)。其中肺癌组织RyR1mRNA表达水平显著高于肺良性肿瘤组织(P=0.000)；肺癌组织RyR1mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织(P=0.000)；肺良性肿瘤组织与癌旁正常组织的RyR1mRNA水平的比较,差异无统计学意义(P=0.155)。即癌组织的RyR1mRNA表达水平显著高于良性肿瘤组织和癌旁正常组织,良性肿瘤组织与癌旁组织的差异无统计学意义。(2) LSD-t检验分析RyR1mRNA与肺癌的临床分期关系发现：(1)Ⅰ期肺癌患者中RyR1mRNA表达水平(0.248±0.052)低于Ⅱ期(0.268±0.056)的患者(P=0.003)；(2)Ⅰ期的(0.248±0.052)低于Ⅲ期(0.260±0.056)(P=0.024)；(3)Ⅱ期和Ⅲ期之间的比较差异无统计学意义(P=0.237)。由此可看出,早期肺癌RyR1mRNA表达水平较低。(3)t检验检测到男性患者的RyR1mRNA表达水平(0.261±0.053)与女性(0.259±0.061)比较,差异无统计学意义(P=0.889)；年龄<60岁的的患者RyR1mRNA表达水平(0.266±0.058)与>60岁(0.255±0.054)的比较,差异无统计学意义(P=0.288)。LSD-t检验三种病理类型肺癌的RyR1mRNA表达水平均数分别为：鳞癌0.259±0.054、腺癌0.261±0.054、腺鳞癌0.260±0.056,对它们进行方差分析显示三组均数之间的差异无统计学意义(F=0.007,P=0.993。无淋巴结转移的患者(0.247±0.049)和有淋巴结转移的(0.264±0.058)比较,差异无统计学意义(P=0.152)。(4)用ROC曲线和excel计算出的最佳诊断界值为0.207；Kaplan-Meier分析得出RyRl基因阳性患者的中位生存时间为21.9个月,阴性为39.3月,差别有统计学意义(P=0.000)。(5)根据COX比例风险回归模型分析得知性别、年龄、病理类型和化疗方案等因素的回归系数的P值均大于0.05,提示患者的预后与它们无关。但淋巴结转移的回归系数为1.370(P=0.008)、临床分期的回归系数为1.018(P=0.000)、RyR1mRNA表达的回归系数为0.992(P=0.001),表示三因素均是影响肺癌患者预后的独立危险因素。[结论](1)肺癌组织的RyR1mRNA表达水平明显高于良性肿瘤组织和癌旁正常组织,良性肿瘤组织与癌旁正常组织的差异无统计学意义。(2)RyRl基因mRNA的转录水平与肺癌患者的性别、年龄、临床分期和病理类型无关。(3)早期肺癌组织的RyR1mRNA表达水平明显低于中晚期(P<0.05)。(4)肿瘤临床分期、淋巴结转移和RyR1mRNA的表达为影响肺癌患者生存时间的独立影响因素。