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第一部分:前列腺癌细胞系中与LEF1相关miRNAs高通量筛选及验证目的筛选并验证与LEF1相关的miRNAs表达变化。方法利用3种前列腺癌细胞系LNCaP (LEF1低表达),]NCaP-AI (LEF1高表达)和LNCaP-AIshLEF1(LEF1低表达)做miRNA基因芯片分析。利用TaqMan探针实时定量PCR技木验证miRNA基因芯片结果。结果在miRNA基因芯片所覆盖的687个miRNAs中,通过LNCaP-AI/LNCaP和LNCaP-AI/LNCaP-AILEF1shRNA两组数据做聚类分析发现共有18个miRNAs有超过2倍的表达水平差异,其中LNCaP-AI/LNCaP组中miR-34a表达下调了6.97倍,而miR-181a上调了12.36倍。利用TaqMan探针实时定量PCR技术验证表达上调及下调变化排在前9的miRNAs,发现miR-34a及miR-181a实时定量PCR结果与基因芯片结果一致,而且表达变化差异分别位于下调和上调中最高。结论在前列腺癌细胞系中,miR-34a与LEF1基因表达负相关,miR-181a与LEF1基因表达正相关,故选择miR-34a和miR-181a做进一步研究。第二部分:miR-34a及miR-181a对体外前列腺癌EMT及侵袭功能研究目的体外实验探讨miR-34a及miR-181a调控前列腺癌细胞EMT及侵袭功能方法利用化学合成的miR-34a或miR-181a模拟物及抑制物模拟过表达或低表达特定microRNA;选择E-cadherin及N-cadherin作为EMT标志物,Western-blot检测其蛋白表达水平;BD基质胶侵袭实验及transwell小室检测侵袭及迁移能力。结果在LNCaP-AI和C4-2B细胞中,miR-34a抑制EMT及侵袭能力,而miR-181a抑制物抑制EMT及侵袭能力;在LNCaP和C4-2B细胞中,miR-34a抑制物促进EMT及侵袭能力,而miR-181a促进EMT及侵袭能力。结论前列腺癌中,miR-34a抑制EMT及侵袭能力,miR-181a促进EMT及侵袭能力。第三部分:LEF1与m i R-34a及miR-181a作用机制研究目的探索miR-34a、LEF1和miR-181a三者之间调控作用关系方法TaqMan实时定量PCR及Western-blot检测基因及蛋白表达水平变化;双荧光素酶报告基因实验验证miR-34a特异性结合LEF13’UTR;利用ChIP方法分析LEF1对miR-181a启动子区域调控作用。结果miR-34a通过靶向结合LEF13’UTR在mRNA水平及蛋白水平负向调控LEF1,miR-34a在mRNA水平同时负向调控LEF1及miR-181a。LEF1在转录水平靶向结合has-miR-181a-2上游启动子区域促进miR-181a表达。结论miR-34a-LEF1-miR-181a调控轴在前列腺癌EMT及侵袭中起到重要调节作用。