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目的:
本课题运用扶正透毒祛毒复方含药血清(以下均简称为含药血清)对人慢性粒细胞白血病急变期耐药细胞株K562/A02(以下简称K562/A02)进行处理,检测不同剂量含药血清对K562/A02耐药率、抑制率、阿霉素(ADM)浓度及Bcl-2表达的影响,观察K562/A02经不同剂量含药血清处理后的逆转情况,并探究其逆转K562/A02的作用机制。
方法:
1.中药复方制备:扶正透毒祛毒复方采用常规药物煎煮方法,水煎后将中药药液浓缩,浓度为1g/ml,置于4℃环境中保存。
2.含药兔血清制备:24只新西兰大白兔被随机分为4组,分别为扶正透毒祛毒复方高、中、低剂量实验组和对照组,实验组用扶正透毒祛毒复方连续灌胃3天,空白对照组正常喂养。末次灌胃结束后2h,在无菌条件下行股动脉取血,分离血清,同组内血清混合,灭活并储存备用。空白组股动脉取血方法与实验组相同。
3.细胞培养:在37℃、5%CO2条件下培养人慢性粒细胞白血病急变期细胞K562(以下均简称K562)及K562/A02,在K562/A02培养体中加入ADM,取对数生长期细胞,2~3d进行一次传代,同时进行细胞培养液的更换。
4.①MTT法检测ADM对K562及K562/A02的细胞毒性,并计算K562/A02对ADM的耐药倍数;②通过MTT法检测经不同剂量含药血清联合ADM处理后的K562/A02对ADM耐药的逆转倍数;③MTT法检测不同剂量含药血清对K562、K562/A02的抑制率,以观察扶正透毒祛毒复方对K562、K562/A02增殖的影响;④运用流式细胞仪(FCM)检测不同剂量含药血清对K562/A02内ADM荧光强度及Bcl-2表达,以探讨扶正透毒祛毒复方逆转耐药的作用机制。
结果:
1.K562/A02的耐药倍数:K562、K562/A02在不同浓度ADM的培养液中培养72h后,根据半数抑制浓度IC50算出K562/A02耐药倍数为34.92倍。
2.不同剂量含药血清对K562/A02耐药倍数的影响:高剂量含药血清+ADM组(HD+ADM组)逆转倍数为28.17倍;中剂量含药血清+ADM组(MD+ADM组)逆转倍数为9.96倍;低剂量含药血清+ADM组(LD+ADM组)逆转倍数为5.82倍。
3.不同剂量含药血清对K562、K562/A02抑制率的影响:不同剂量的含药血清均能够抑制K562、K562/A02的增殖,且抑制作用与剂量呈正相关,各各组间比较,均具有显著统计学差异,P<0.01。
4.不同剂量含药血清对K562/A02中ADM蓄积浓度的影响:各组耐药细胞内ADM的蓄积浓为:HD+ADM组>IFN+ADM组>MD+ADM组>LD+ADM组>NS+ADM组。
5.不同剂量含药血清对K562/A02中Bcl-2的影响:不同剂量含药血清都可以降低Bcl-2的表达,各组Bcl-2表达情况为:HD+ADM组<IFN+ADM组<MD+ADM组<LD+ADM组<NS+ADM组。
结论:
(1)扶正透毒祛毒复方可有效逆转K562/A02对ADM的耐药性,且与剂量呈正相关;(2)扶正透毒祛毒复方在一定程度上可抑制K562、K562/A02的增殖,具有一定的细胞毒作用;(3)扶正透毒祛毒复方通过增加K562/A02内ADM的蓄积浓度,同时降低Bcl-2的表达,增加了其对ADM的敏感性,逆转了其对ADM的耐药性。
本课题运用扶正透毒祛毒复方含药血清(以下均简称为含药血清)对人慢性粒细胞白血病急变期耐药细胞株K562/A02(以下简称K562/A02)进行处理,检测不同剂量含药血清对K562/A02耐药率、抑制率、阿霉素(ADM)浓度及Bcl-2表达的影响,观察K562/A02经不同剂量含药血清处理后的逆转情况,并探究其逆转K562/A02的作用机制。
方法:
1.中药复方制备:扶正透毒祛毒复方采用常规药物煎煮方法,水煎后将中药药液浓缩,浓度为1g/ml,置于4℃环境中保存。
2.含药兔血清制备:24只新西兰大白兔被随机分为4组,分别为扶正透毒祛毒复方高、中、低剂量实验组和对照组,实验组用扶正透毒祛毒复方连续灌胃3天,空白对照组正常喂养。末次灌胃结束后2h,在无菌条件下行股动脉取血,分离血清,同组内血清混合,灭活并储存备用。空白组股动脉取血方法与实验组相同。
3.细胞培养:在37℃、5%CO2条件下培养人慢性粒细胞白血病急变期细胞K562(以下均简称K562)及K562/A02,在K562/A02培养体中加入ADM,取对数生长期细胞,2~3d进行一次传代,同时进行细胞培养液的更换。
4.①MTT法检测ADM对K562及K562/A02的细胞毒性,并计算K562/A02对ADM的耐药倍数;②通过MTT法检测经不同剂量含药血清联合ADM处理后的K562/A02对ADM耐药的逆转倍数;③MTT法检测不同剂量含药血清对K562、K562/A02的抑制率,以观察扶正透毒祛毒复方对K562、K562/A02增殖的影响;④运用流式细胞仪(FCM)检测不同剂量含药血清对K562/A02内ADM荧光强度及Bcl-2表达,以探讨扶正透毒祛毒复方逆转耐药的作用机制。
结果:
1.K562/A02的耐药倍数:K562、K562/A02在不同浓度ADM的培养液中培养72h后,根据半数抑制浓度IC50算出K562/A02耐药倍数为34.92倍。
2.不同剂量含药血清对K562/A02耐药倍数的影响:高剂量含药血清+ADM组(HD+ADM组)逆转倍数为28.17倍;中剂量含药血清+ADM组(MD+ADM组)逆转倍数为9.96倍;低剂量含药血清+ADM组(LD+ADM组)逆转倍数为5.82倍。
3.不同剂量含药血清对K562、K562/A02抑制率的影响:不同剂量的含药血清均能够抑制K562、K562/A02的增殖,且抑制作用与剂量呈正相关,各各组间比较,均具有显著统计学差异,P<0.01。
4.不同剂量含药血清对K562/A02中ADM蓄积浓度的影响:各组耐药细胞内ADM的蓄积浓为:HD+ADM组>IFN+ADM组>MD+ADM组>LD+ADM组>NS+ADM组。
5.不同剂量含药血清对K562/A02中Bcl-2的影响:不同剂量含药血清都可以降低Bcl-2的表达,各组Bcl-2表达情况为:HD+ADM组<IFN+ADM组<MD+ADM组<LD+ADM组<NS+ADM组。
结论:
(1)扶正透毒祛毒复方可有效逆转K562/A02对ADM的耐药性,且与剂量呈正相关;(2)扶正透毒祛毒复方在一定程度上可抑制K562、K562/A02的增殖,具有一定的细胞毒作用;(3)扶正透毒祛毒复方通过增加K562/A02内ADM的蓄积浓度,同时降低Bcl-2的表达,增加了其对ADM的敏感性,逆转了其对ADM的耐药性。