【摘 要】
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目的:结合生物信息学技术,应用高通量测序在小鼠脾脏中筛选影响脓毒症预后的关键差异基因。方法:1.将小鼠随机分为对照组和脓毒症模型组,通过腹腔注射不同剂量脂多糖（LPS,Lipopolysaccharide）建立不同预后的小鼠脓毒症模型,根据7天存活率实验,筛选出脓毒症生存组、死亡组的最佳造模剂量。2.采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测对照组、脓毒症生存组、脓毒症死亡组小鼠外周血浆外周血浆中炎症因
【基金项目】
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四川省科技厅项目（2019JDPT0003）； 四川省科技厅项目（2020YFS0517）； 泸州市-西南医科大学联合课题（2019LZXNYDJ32）；
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目的:结合生物信息学技术,应用高通量测序在小鼠脾脏中筛选影响脓毒症预后的关键差异基因。方法:1.将小鼠随机分为对照组和脓毒症模型组,通过腹腔注射不同剂量脂多糖（LPS,Lipopolysaccharide）建立不同预后的小鼠脓毒症模型,根据7天存活率实验,筛选出脓毒症生存组、死亡组的最佳造模剂量。2.采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测对照组、脓毒症生存组、脓毒症死亡组小鼠外周血浆外周血浆中炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10）的表达水平;采用HE染色法检测各组小鼠脾脏免疫器官组织学变化。3.采用高通量测序加生物信息学分析的方法,筛选出脓毒症生存组和死亡组小鼠全脾脏组织中组间差异基因（DEGs）,对照组、脓毒症生存组和死亡组小鼠全脾脏组织高通量测序,利用生物信息学筛选生存、死亡组间差异基因（DEGs）,使用火山图与热图进行展示,并对DEGs进行GO、KEGG注释富集分析;构建DEGs的PPI网络,并使用Cytoscape软件中Mcode和Cytohubba插件筛选关键基因。4.采用RT-PCR法进一步验证关键基因表达。结果:1.造模小鼠体征变化及7天存活率实验结果显示,脓毒症生存组造模的最佳LPS剂量为15mg/kg（30%死亡率）,死亡组造模最佳剂量为30mg/kg（80%死亡率）。2.ELISA结果显示,对照组、脓毒症生存组和死亡组小鼠外周血浆中IL-6表达量分别为46.54±5.185,59.66±11.17,94.78±4.619 pg/ml,TNF-α表达量分别为282.3±50.97,356.9±33.54,162.7±19.19pg/ml,IL-1β表达量分别为67.70±1.82,76.57±3.74,103.2±6.77pg/ml,IL-10表达量分别为301.1±34.48,216.5±18.30,162.7±19.19pg/ml。与对照组相比,脓毒症生存组、死亡组小鼠外周血促炎因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）表达明显升高,抗炎因子（IL-10）表达水平降低（P＜0.05）;与脓毒症生存组比较,死亡组促炎因子升高,抗炎因子表达量降低（P＜0.05）。HE染色结果提示,相较于对照组,生存组与死亡组脾脏白髓均出现不同程度的扩张和融合,边界不清,其中以死亡组最为显著。3.生物信息学分析提示脓毒症生存与死亡组脾脏间有2999个DEGs,其中1185个DEGs上调,1814个DEGs下调。筛选出“造血细胞谱系”、“原发性免疫缺陷”、“非洲锥虫病”、“利什曼病”、“B细胞受体信号通路”为排名前5的DEGs富集通路,Iift1、Iift3、Mx1为筛选出的3个关键基因。4.RT-PCR结果显示,与生存组相比,Iift1、Iift3、Mx1在死亡组中表达下调,结果有统计学差异（P＜0.05）。结论:通过高通量测序和生物信息学预测出Ifit1、Ifit3和Mx1三个与脓毒症死亡预后相关的关键基因。上述关键基因可能通过病毒感染相关免疫机制影响脓毒症预后。
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