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第一部分野百合碱诱导大鼠肺动脉高压对肺血管Jagged2/Notch3信号分子表达的影响目的:探讨大鼠经野百合碱诱导肺动脉高压后,肺血管组织中Jagged2/Notch3信号分子的表达变化方法:1.将45只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分组为正常组(C组)、溶剂组(S组)和模型组(M组),每组15只,肺动脉高压模型组经腹腔内一次性注射野百合碱50mg/kg,4周后建立;溶剂组经腹腔内一次性注射等剂量的溶媒,4周后建立;正常组未做任何相关处理。2.4周时,通过右心导管术,测定平均肺动脉压(mPAP)和右心室收缩压(RVSP)分析肺血流动力学变化。并通过病理学观察肺血管重构,计算右心肥厚指数(RHVI)和中膜厚度百分比(MT%),分析肺动脉高压严重程度。3.待血流动力学检测完毕,利用栓塞法处死大鼠,打开胸腔,分离出大鼠肺动脉及其上缘的部分中动脉和肺叶,利用免疫组织化学法分析三组肺血管Jagged2/Notch3/Hes5蛋白表达的变化;采用实时荧光定量PCR方法检测三组肺血管壁Jagged2/Notch3/Hes5 mRNA表达的变化。统计学分析模型组中Jagged2/Notch3 m RNA与mPAP的相关性。4.实验分析所得数据用均数±标准差(mean±SD)形式表示,经统计学软件SPSS18.0分析计算。各组间的差异比较采用单因素方差分析法,相关性的分析采用Pearson线性相关法。结果:1.与正常和溶剂组相比较,4周时HE染色发现野百合碱组的血管壁显著增厚,中膜厚度百分比(MT%)显著增加(MT%:0.71±0.04 vs 0.38±0.05和0.37±0.05,Mn=12,Sn=13,Cn=14,P<0.05);此外野百合碱模型组的mPAP、RVSP和RVHI均显著高于正常对照和溶剂对照组(mPAP:29.92±5.03 mm Hg vs 16.82±2.17 mmHg和17.20±1.97 mmHg;RVSP:56.09±18.89 mmHg vs 25.47±1.56 mmHg和25.69±1.94 mmHg;RVHI:0.42±0.04vs 0.21±0.01和0.21±0.02;Mn=12,Sn=13,Cn=14,P<0.05)。正常组和溶剂组之间差异无显著性意义(P>0.05)。2.免疫组织化学结果发现Jagged2蛋白的表达位置主要为肺小动脉内膜内皮细胞,Notch3/Hes5蛋白的表达位置主要为肺小动脉中层的平滑肌细胞。与溶剂对照组以及正常对照组相比较,模型组肥厚的肺小动脉可见Jagged2/Notch3/Hes5蛋白的表达量显著升高(Notch3:1.7080±0.1330 vs 0.9915±0.0378和0.9982±0.0007;Jagged2:10.2700±0.2543vs 0.9917±0.0160和0.9982±0.0007;Hes5:1.8030±0.2783 vs 0.9825±0.0160和0.9982±0.0007;Mn=12,Sn=13,Cn=14,P<0.05)。正常组和溶剂组之间差异无显著性意义(P>0.05)。3.Notch3 mRNA和mPAP存在正相关(r=0.587,p=0.045,p<0.05);Jagged2 mRNA和mPAP相关性无统计学差异(r=-0.353,p=0.260,p>0.05)。结论:利用野百合碱单次腹腔注射,4周时成功诱导肺血管重构和肺动脉高压,并且肺血管Jagged2/Notch3/Hes5信号分子的表达均明显升高,Notch3 mRNA和肺血流动力学之间存在正相关,而Jagged2 mRNA和肺血流动力学之间相关性无统计学差异。第二部分辛伐他汀干预野百合碱诱导肺动脉高压大鼠肺血管重构与Jagged2/Notch3信号的关系目的:探讨辛伐他汀干预野百合碱诱导肺动脉高压大鼠肺血管重构与Jagged2/Notch3信号的关系方法:1.24只Sprague-Dawley(SD)大鼠给予一次性腹腔注射野百合碱50mg/kg建立肺动脉高压病理模型。3周后,按随机分组法分为他汀组(simvastatin,S组,n=12)和对照组(placebo,P组,n=12),他汀组给予辛伐他汀(2mg/kg/day)灌胃2周,对照组给予同等剂量的溶剂生理盐水灌胃2周。2.辛伐他汀灌胃2周后,待血流动力学监测完毕,利用栓塞法处死大鼠,打开胸腔,分离出大鼠肺动脉及其上缘的部分中动脉和肺叶组织,参照前面方法行HE染色,病理形态学分析各组肺血管重构的变化;并分别通过免疫荧光双标技术、蛋白免疫印迹技术(Western Blotting)和RT-PCR技术检测各组肺血管Jagged2/Notch3表达的变化;3.实验分析所得数据用均数±标准差(mean±SD)形式表示,经统计学软件SPSS18.0统计分析计算。2组间均数的差异比较采用独立样本T检验方法,相关性的分析采用Pearson线性相关法。结果:1.辛伐他汀灌胃2周后,他汀组mPAP、RVSP、RVHI、MT%等指标均较对照组明显降低(m PAP:31.55±3.63 mm Hg vs 21.11±3.09 mm Hg;RVSP:56.09±18.89 mm Hg vs30.06±3.08 mm Hg;RVHI:0.45±0.09 vs 0.34±0.04;MT%:0.72±0.13 vs 0.51±0.05;Cn=12,Sn=12,P<0.05)。2.利用免疫荧光双标技术、蛋白印迹技术和实时荧光定量PCR技术分析各组蛋白和RNA表达量后发现,Jagged2主要表达于肺小动脉内膜的内皮细胞,Notch3主要表达于肺小动脉中层的平滑肌细胞,他汀组Notch3蛋白和m RNA表达较对照组显著降低,而Jagged2蛋白和m RNA表达较对照组显著升高。他汀组和对照组结果分别为(Notch3:0.4331±0.0074 vs 0.5165±0.0061;Jagged2:0.6160±0.0070 vs 0.4355±0.0140;Notch3m RNA:1.0821±0.1014 vs 2.1221±0.1766;Jagged2 m RNA:0.7017±0.0850 vs0.3874±0.0200;Sn=12,Cn=12,P<0.05)。结论:辛伐他汀能够减轻野百合碱诱导肺动脉高压大鼠的肺血管重构,可能与其干预Jagged2/Notch3信号有关。