解淀粉芽孢杆菌抑菌活性物质提取、鉴定及在香蕉保鲜中的应用

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解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)作为一种生防芽孢杆菌,具有较广的抑菌谱,对多种病原菌都有抑制作用,在生物农药、食品和饲料添加剂、生物医药等方面都具有巨大的应用潜力。不同解淀粉芽孢杆菌有不同的代谢产物和特性,本研究以实验室解淀粉芽孢杆菌作为实验对象,进行发酵培养基响应面优化,对其产生的抑菌成分进行研究,探讨其理化性质和抑菌活性,并利用解淀粉芽孢杆菌的生物颉颃作用,将其抗菌活性产物首次应用于香蕉保鲜。研究的主要结果和结论如下:1.单菌落分离优化中,选取抑菌效果最佳的菌株,较优化前其抑菌活性提高了57.83%,;单因素试验中,最佳配方为葡萄糖10.0 g/L、K2HPO4×3H2O 1.2 g/L、KH2PO41.0 g/L、(NH42SO4 2.00 g/L、柠檬酸钠×3H2O 0.9 g/L、MgSO4×7H2O 0.15 g/L,经响应面优化试验,最佳培养基成分为葡萄糖6.15 g/L、K2HPO4×3H2O 1.2 g/L、KH2PO4 1.0 g/L、(NH42SO4 2.50 g/L、柠檬酸钠×3H2O 1.01 g/L、MgSO4×7H2O 0.15 g/L,较优化前其抑菌活性提高了65.79%,通过实验优化后发酵代谢产物中抑菌活性物质含量明显提高。2.在酸碱稳定性测定中,pH=3时抑菌效果最佳,可达98.08%;在紫外稳定性测定中,当紫外照射在180 s内时,其抑菌率最多下降6.13%;在热稳定性测定中,置于高压灭菌锅中121℃高温灭菌60 min后,抑菌活性为空白组的70.88%;在有机溶剂稳定性测定中,仅甲醇萃取后有抑菌活性;硫酸铵稳定性测定中,50%硫酸铵处理活性最高。根据以上研究结果,解淀粉芽孢杆菌抗菌活性物质在pH≤8、几分钟紫外照射、小于60℃高温、甲醇和50%硫酸铵中具有良好的稳定性。分别对实验室现有的致病菌,包括金黄色葡萄球、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、藤黄微球菌、大肠杆菌、鸡白癜沙门氏菌、标准型和变异型鸡沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌和肠炎沙门氏菌进行抑菌活性测定。根据结果表明,解淀粉芽孢杆菌发酵液对以上10种致病菌均具有抑制效果,且在解淀粉芽孢杆菌发酵液浓度为358.50 mg/mL时,对以上所测定致病菌达到最小杀菌浓度(MBC),即能杀死99.9%供试细菌的最低浓度。3.经过减压硅胶柱层析、高效液相色谱对解淀粉芽孢杆菌抑菌活性物质进行分离,通过质谱、核磁对分离纯化的化合物进行分子量测定,解淀粉芽孢杆菌CGMCC 1.936抑菌活性物质为小分子糖苷类化合物,化合物分子量为325.0,分子式为C12O10NH9。4.随着贮藏期延长,与其他处理相比,通过400 mg/mL解淀粉芽孢杆菌CGMCC1.936抑菌活性物质纯品与保鲜膜复合处理的香蕉,在第5 d时,香蕉的失重率为1.13%,硬度变化41.72%,可滴定酸降低了36.69%,可溶固形物增加了18.18%。可以有效的延缓香蕉的成熟和变质,保持良好的品质。
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