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目的探讨1,25-二羟维生素D3对严重烫伤小鼠应激状态下胰岛素抵抗和炎症反应的影响。方法1.建立30%全身体表面积(TBSA) Ⅲ°烫伤小鼠模型选择健康SPF级KM小鼠130只(中国军事医学科学院实验动物中心),雌雄各半,体质量28-32g,鼠龄6-8周。小鼠背部按30%TBSA用6%Na2S试剂退毛,腹腔注射4%水合氯醛(40mg·kg-1)麻醉,麻醉成功后将小鼠背部脱毛区置于100℃热水中12s,制成烫伤面积为30%的Ⅲ°烫伤模型(病理切片证实,健康组不烫伤),伤后立即腹腔注射2mL·kg-11%TBSA-1乳酸钠林格液复苏,伤后第2天给予半量。创面涂抹2%磺胺嘧啶银霜抗感染1次／天。2.实验动物的分组按随机数字表法将小鼠分成4组,健康组(不烫伤)10只,实验组Ⅰ(烫伤后用药)、实验组Ⅱ(烫伤后用药)和对照组(烫伤后不用药)各40只。分笼饲养各组,常规动物饲料喂食。建模成功后于每隔1日晨8时,给予实验组Ⅰ小鼠1,25-(OH)2VitD31μg·kg-1+0.6mL花生油灌胃,给予实验组Ⅱ小鼠1,25-(OH)2VitD34μg·kg-1+0.6mL花生油灌胃,给予对照组小鼠0.6mL花生油灌胃。1,25-(OH)2VitD3每隔1日晨8时灌胃一次,连续2周。3.观察指标(1)空腹血糖(FBG)实验小鼠禁食过夜,于晨8时断头处死后取血。健康组小鼠一次处死,实验组Ⅰ、实验组Ⅱ和对照组小鼠分别于烫伤后1、3、7、14d各处死10只。各组每次处死小鼠采血时用一次性血糖试纸和血糖仪即时测量FBG。(2)空腹胰岛素(FIns)实验组Ⅰ、实验组Ⅱ和对照组分别于1、3、7、14d各处死10只小鼠时(健康组10只一次性处死),收集血液标本2mL于3000r/min、30mim、4℃离心。收集血清0.8mL于-80℃保存,用于空腹胰岛素测定。实验结束时,将制备好的血清取0.5mL置于样品杯中(剩余0.3mL血清用于血清TNF-α的含量测定),放置于全自动化学发光免疫分析仪上(运用化学发光免疫法测量FIns的含量),调整好检测参数后开始检测,读取光量子数,根据标准曲线计算出FIns含量。(3)计算IR值用稳态模式法(HOMA)计算HOMA-IR,公式为：HOMA-IR=FBG(mmol/L)×FINS(mU/L)/22.5。(4)小鼠血清TNF-α的含量测定取出-80℃保存的血清标本于常温放置30min后,用小鼠TNF-αELISA检测试剂盒检测小鼠血清TNF-α的浓度。(5)免疫组织化学法测创面组织NF-κB阳性率创面组织标本常规石蜡包埋切片,免疫组化试剂盒染色。NF-κB阳性呈棕黄色颗粒(主要在细胞浆和／或细胞核中表达)。高倍镜下(×400倍)随机读取5个不同的视野,计数100个细胞及阳性细胞数,创面组织NF-κB阳性率(%)=(阳性细胞数／总细胞数)×100%。4.统计方法用SPSS18.0软件进行数据的统计和处理。计量资料均以x±s表示,采用单因素方差分析(ANOVA),组间多重比较用LSD-t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1.各组小鼠空腹血糖(FBG)的测定各组处死小鼠时用一次性血糖试纸和血糖仪即时测量FBG,检测结果显示实验组Ⅰ、实验组Ⅱ和对照组小鼠伤后不同时点FBG均高于健康组水平(实验组Ⅱ第14天与健康组比较,P>0.05,余与健康组比较,P<0.05)。同一时点不同组间比较,实验组Ⅰ和实验组Ⅱ小鼠伤后FBG均数均低于对照组水平,且实验组Ⅱ低于实验组Ⅰ；同一时点各组实验小鼠伤后FBG比较差异均有统计学意义(P<0.05)。2.各组小鼠空腹血清胰岛素(FIns)的测定运用化学发光免疫法测量FIns的含量,实验组Ⅰ、实验组Ⅱ和对照组小鼠伤后不同时点HOMA-IR均数均高于健康组水平(实验组Ⅱ第14天与健康组比较,P>0.05,余与健康组比较,P<0.05)。同一时点不同组间比较,实验组Ⅰ和实验组Ⅱ小鼠伤后FIns均数均低于对照组水平,且实验组Ⅱ低于实验组Ⅰ；同一时点各组实验小鼠伤后FIns t匕较差异均有统计学意义(P<0.05)。3.各组小鼠胰岛素抵抗(IR)健康组小鼠HOMA-IR均数为4.75±0.48。实验组Ⅰ、实验组Ⅱ和对照组小鼠伤后不同时点HOMA-IR均数均高于健康组水平(实验组Ⅱ第14天与健康组比较,P>0.05,余与健康组比较,P<0.05)。同一时点不同组间比较,实验组Ⅰ和实验组Ⅱ小鼠伤后HOMA-IR均数均低于对照组水平,且实验组Ⅱ低于实验组Ⅰ；同一时点各组实验小鼠伤后HOMA-IR比较差异均有统计学意义(P<0.05)。同一组不同时点比较,烫伤小鼠伤后第3天HOMA-IR均数达最高,以后逐渐降低；同一组内烫伤小鼠伤后不同时点HOMA-IR比较差异均有统计学意义(P<0.05)。4.各组实验小鼠不同时点血清TNF-α含量的比较健康组小鼠血清TNF-α含量为(364.10±46.13) ng/L。实验组Ⅰ、实验组Ⅱ和对照组小鼠伤后不同时点血清TNF-α含量均数均高于健康组水平,实验组Ⅱ小鼠伤后第14天血清TNF-α含量均数接近于健康组水平(实验组Ⅱ第14天与健康组比较,P>0.05；余与健康组比较,P<0.05)。同一时点不同组间比较,实验组Ⅰ和实验组Ⅱ小鼠伤后血清TNF-α含量均数均低于对照组水平,且实验组Ⅱ低于实验组Ⅰ；同一时点各组实验小鼠伤后血清TNF-α含量均数两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。同一组不同时点比较,烫伤小鼠伤后血清TNF-α含量均数第1天最高,以后逐渐降低；同一组内烫伤小鼠伤后不同时点血清TNF-α含量比较差异均有统计学意义(P<0.05)。5.各组实验小鼠创面组织NF-κB免疫组织化学染色结果健康组小鼠皮肤组织NF-κB表达的阳性率为(13.67±6.28)%。实验组Ⅰ实验组Ⅱ和对照组小鼠伤后不同时点创面组织NF-κB表达的阳性率均数均高于健康组水平,实验组Ⅱ小鼠伤后第7天创面组织NF-κB表达的阳性率均数接近于健康组水平(实验组Ⅱ第7天与健康组比较,P>0.05；余与健康组比较,P<0.05)。同一时点不同组间比较,实验组Ⅰ和实验组Ⅱ小鼠伤后创面组织NF-κB表达的阳性率均低于对照组水平,且实验组Ⅱ低于实验组Ⅰ；同一时点各组实验小鼠伤后创面组织NF-κB表达的阳性率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。同一组不同时点比较,烫伤小鼠伤后创面组织NF-κB表达的阳性率均数第1天最高,以后逐渐降低；同一组内烫伤小鼠伤后不同时点创面组织NF-κB表达的阳性率较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论1.实验组Ⅰ、实验组Ⅱ和对照组小鼠伤后空腹血糖(FBG)、空腹血清胰岛素(FIns)较健康组明显升高,证明30%全身体表面积(TBSA) Ⅲ°烫伤小鼠模型建模成功(病理切片证实),产生明显胰岛素抵抗(IR)。2.对照组与实验组Ⅰ、实验组Ⅱ小鼠空腹血糖(FBG)、空腹血清胰岛素值(FIns)比较,差异均有统计学意义(P<0.05),证明1,25-(OH)2VitD3能有效控制胰岛素抵抗(IR)。3.实验组Ⅰ、实验组Ⅱ和对照组小鼠伤后不同时相点血清TNF-α含量两两比较和同一组内不同时相点两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组Ⅰ、实验组Ⅱ和对照组小鼠伤后不同时相点创面组织NF-κB表达的阳性率两两比较和同一组内不同时相点两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。1,25-(OH)2VitD3能有效抑制烧(烫)伤后小鼠血清TNF-α含量和创面组织NF-κB表达的阳性率,进而抑制胰岛素抵抗(IR),改善和促进创面的愈合。