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岩黄连为罂粟科植物石生黄堇(Corydalis saxicola Bunting)的全草,别名土黄连(广西)、岩胡(贵州)、岩连(四川、云南);味苦、性凉;具有清热解毒、利湿、止痛止血之功效,主治肝炎、口舌糜烂、火眼、目翳、痢疾、腹泻、腹痛、痔疮出血等。据文献资料研究表明,岩黄连中主要有效成分为总生物碱,其中又以小檗碱型季铵碱类成分——脱氢卡维丁含量最高,药理试验证明此类化合物具有潜在的抗HBV活性和肝保护活性,临床上用于治疗肝炎和原发性肝癌等,疗效确切。
本论文主要对岩黄连药材的质量标准、岩黄连总生物碱提取工艺、岩黄连总生物碱的质量标准及稳定性等方面进行了系统的研究,不仅为提高原岩黄连药材的地方标准提供了参考依据,而且通过对总生物碱提取工艺的研究,优化筛选出一条稳定、可控的岩黄连总生物碱提取工艺路线,并制定岩黄连总生物碱的质量标准及对稳定性进行了初步研究,为进一步的制剂研究提供依据。
1、岩黄连药材质量标准研究
本文对岩黄连药材质量标准进行了深入研究,补充了原标准的不足。除了采用TLC进行定性鉴别,还建立UV法测定药材中总生物碱的含量及HPLC法测定岩黄连药材中脱氢卡维丁的含量,并对方法学进行了系统考察。药材质量标准的建立不仅为提高原岩黄连地方标准提供了参考依据,也为制备岩黄连总生物碱提供质量保证,使总生物碱提取工艺科学合理的进行。此外,还研究了三个不同产地(广西东兰,云南、贵州)的岩黄连药材之间的差异,为本岩黄连总生物碱制备工艺的药材来源作了限定。
2、岩黄连总生物碱提取工艺研究
本文以岩黄连总生物碱、脱氢卡维丁及总生物碱纯度为指标,对总生物碱提取工艺条件及影响因素进行筛选。首先通过比较乙醇回流提取、乙醇渗漉、酸水回流提取、酸水渗漉等不同提取方式,确定了采用提取效率高的乙醇回流提取;然后针对乙醇浓度、乙醇用量、提取次数、提取时间四个因数,采用L9(34)正交试验法对岩黄连药材的提取工艺进行了考察及优化,确定了岩黄连药材的最佳提取工艺,即每次加10倍量的75%乙醇提取,共三次,每次2小时。在岩黄连总生物碱的精制纯化工艺方面,比较了酸碱处理、有机溶剂提取、阳离子树脂、乙醇重结晶、水重结晶等纯化方法,最终确定了采用二次酸碱处理法对岩黄连总生物碱进行精制纯化,即用16倍量的1%盐酸提取粗碱,浓缩至相对密度1.06~1.08,调pH6~7,收集沉淀,干燥所得岩黄连总生物碱纯度>50%,转移率>60%,脱氢卡维丁转移率>50%,适合工业化生产。
3、岩黄连总生物碱质量标准研究
本文除对岩黄连总生物碱进行酸碱度、水分等常规检查外,还应用生物碱的沉淀反应及TLC对其进行鉴别;用UV,HPLC等分析方法手段,对岩黄连总生物碱的质量标准进行了深入研究.考察并建立了岩黄连总生物碱的UV测定法,以脱氢卡维丁为对照品,在347nm下测定样品紫外吸收,样品平均回收率为101.78%,样品中总生物碱含量>50%。通过考察系统适用性、线性关系、稳定性、精密度、重复性、加样回收率等方法学内容,建立了岩黄连总生物碱中活性成分脱氢卡维丁的HPLC测定法,以乙腈-0.01mol/L磷酸二氢钾水溶液(调pH=3.0)(25:75)为流动相,柱温30℃,流速1.0ml/min,在347nm下采样30min,测定样品中脱氢卡维丁含量,样品平均回收率为99.50%,三批中试样品中脱氢卡维丁平均含量>10.0%。
4、岩黄连总生物碱的稳定性研究
通过室温留样考察和加速稳定性试验对岩黄连总生物碱质量标准项下性状、鉴别、水分、pH值、总生物碱含量、脱氢卡维丁含量等进行研究,初步考察了本品的稳定性,为制备安全、有效、可控的制剂提供依据。