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目的：在前期整体实验研究的基础上，通过研究补肾通络方对不同月龄大鼠离体Leydig细胞T分泌及相关T合成酶StAR、3β-HSD蛋白的表达，探讨该方的可能作用机制，为临床治疗迟发性性腺功能低下(LOH)提供依据。 方法：48只SD大鼠分为三组：4月龄组16只，14月龄组16只，18月龄组16只。每次实验随机取4、14、18月龄组大鼠各6只，采用酶消化法分离大鼠睾丸Leydig细胞，将分离、纯化的睾丸Leydig细胞分为鉴定组、增殖计数组、分泌T活性测定组和StAR、3β-HSD蛋白酶表达测定组并置相应24孔培养板中进行培养。Leydig细胞增殖计数组和Leydig细胞分泌T活性测定组分别予以DMEM、补肾通络方(低、中、高剂量)和金匮肾气汤(低、中、高剂量)，连续5天；StAR、3β-HSD蛋白酶表达测定组分别予以DMEM、补肾通络方(低、中、高剂量)和金匮肾气汤(低、中、高剂量)，连续24h。按实验设计，进行3β-HSD染色、CCK-8增殖计数、放射免疫法测定Leydig细胞T分泌活性、Westernblot法测StAR、3β-HSD的蛋白表达。 结果：1.大鼠离体Leydig细胞增殖活性呈增龄性下降、StAR蛋白、3β-HSD表达呈增龄性下降。 2.Leydig细胞增殖：与空白组相比，补肾通络方低剂量组对4、14、18月龄大鼠离体Leydig细胞增殖活性有抑制作用，补肾通络方中、高剂量组能增加4、14月龄大鼠睾丸离体Leydig细胞增殖活性(P<0.05)，以48～72h最佳；补肾通络方高剂量组能明显增加18月龄大鼠睾丸离体Leydig细胞增殖活性(P<0.05)，以48～72h最佳。补肾通络方组与金匮肾气汤组Leydig细胞增殖活性无统计学差异(P>0.05)。 3.Leydig细胞T分泌水平：实验结果显示，补肾通络方不同剂量组对4、14、18月龄大鼠Leydig细胞分泌T的作用不同：低剂量组对3组Leydig细胞分泌T的作用与空白组比较没有明显差异(P>0.05)；中剂量组对4、14月龄大鼠Leydig细胞分泌T的作用与低、高剂量组比较有明显差异(P<0.05)；高剂量组对18月龄大鼠Leydig细胞分泌T的作用优于中、低剂量组，有明显差异(P<0.05)。与4月龄大鼠Leydig细胞相比，补肾通络方中高剂量组能促进14、18月龄大鼠Leydig细胞分泌T(P<0.05)。补肾通络方中、高剂量组与金匮肾气汤中、高剂量组相比未见明显差异(P>0.05)。 4.睾酮合成酶：补肾通络方中、高剂量组能上调4、14月龄大鼠StAR蛋白、3β-HSD的蛋白表达(P<0.05，P<0.05)。补肾通络方高剂量组能上调18月龄大鼠StAR蛋白、3β-HSD的蛋白表达(P<0.05)。与金匮肾气汤组大鼠相比，两组StAR蛋白、3β-HSD的蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。 结论：1.补肾通络方能提高4、14、18月龄大鼠离体Leydig细胞增殖，上调Leydig细胞StAR蛋白、3β-HSD的蛋白表达，从而提高Leydig细胞分泌T水平。 2.及早干预Leydig细胞合成分泌功能优于晚期治疗。