遗传学研究发现由某些必需基因突变引起的致死表型可以通过另一基因突变或高表达来挽救,后者被称为抑制子。遗传抑制子筛选在遗传工程研究、代谢途径调控、遗传育种以及癌症药物靶点鉴定等方面具有重要应用。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)作为单细胞模式生物,其遗传学研究为真核生物基础和应用研究提供重要见解。本课题利用酿酒酵母作为模型,旨在建立必需基因遗传抑制子的高效筛选体系,并验证其在化疗药物耐受基因鉴定中的应用性。本研究选取酿酒酵母必需基因RBA 50和GPN2作为例子,以温度敏感突变株rba50ts和gpn2ts作为主要试验对象,通过随机突变和高拷贝文库筛选建立必需基因遗传抑制子高效筛选体系。此外,本研究利用抑癌基因ATM/ATR的酵母模型mec1突变体,通过该筛选体系筛选喜树碱(CPT)耐药基因,验证其在化疗药物耐受基因鉴定中的应用性。一方面,本研究通过随机突变筛选获得rba50ts回复突变株,全基因组重测序鉴定基因突变信息。本筛选方法共鉴定22个rba50ts候选基因组抑制子。通过同源重组构建rba50ts-ygk3 G115R菌株成功验证ygk3 G1 15R能回复rba50ts生长缺陷,是突变基因rba50基因组抑制子。同时,本研究利用酵母高拷贝质粒文库筛选gpn2ts回复菌株,成功鉴定31个剂量抑制子,均能抑制gpn2ts生长缺陷。研究结果证明所建立的必需基因遗传抑制子筛选体系可有效富集抑制子。另一方面,本研究利用遗传抑制子筛选体系,建立了化疗药物耐药基因筛选的酵母模型和方法。酿酒酵母必需基因MEC1是抑癌基因ATM/ATR同源基因,其基因敲除导致致死表型,SML1敲除能抑制该表型,本研究利用该抑制原理构建了mec1Δ菌株作为肿瘤酵母模型,mec1Δ对化疗药物CPT敏感。本研究采用基因组抑制子筛选鉴定了 26个潜在耐药基因,其中Top1是CPT已知的药物靶点。本研究鉴定的top1 R576G突变体使得mec1Δ耐药性增加,证实药物靶点突变是CPT耐药机制,也进一步证明该筛选体系在化疗药物耐受基因鉴定中有重要的应用价值。本研究利用酿酒酵母温度敏感突变株rba50ts和gpn2ts,通过随机突变和高拷贝文库筛选建立了必需基因遗传抑制子筛选体系。经验证该筛选体系可有效富集抑制子且在化疗药物耐受基因鉴定中也有很好的应用价值。此外,该筛选体系一次性能获得多个与目标基因功能相关基因,既能节约探索时间,又能为相关研究提供线索。