苄嘧磺隆、乙草胺及其复配制剂的微生物降解和胁迫响应研究

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乙草胺、苄嘧磺隆以及乙·苄复配制剂是目前最广泛使用的稻田新型除草剂。但大量施用对后茬敏感作物造成明显药害,对农田生态环境带来严重污染。除草剂在土壤中的残留一般通过物理、化学与生物学过程而消失,其中微生物降解是主要途径。因此,利用降解微生物消除环境污染具有重要意义。通过富集培养筛选出一个能以乙草胺为唯一碳源、并耐受苄嘧磺隆的复合菌系66C,从66C复合菌系中分离得到4个细菌菌株,分别命名为66C-1、66C-2、66C-3、66C-4。通过形态特征、分子系统发育分析和生理生化3方面对菌株进行鉴定,将66C-1、66C-2、66C-3、66C-4分别鉴定为粘质沙雷氏菌、Psedomona shunanensi s、恶臭假单胞菌、硝化还原假单胞菌。单一的菌株不能降解乙草胺,只有当这4株菌以1:1:1:1混合培养时才会生长,达到共同降解乙草胺的目的,将4株菌等比例构成的混合菌重新命名为HXDW。在乙草胺初始浓度为100mg/L、pH9.0、NaCl浓度为2%的无机盐培养基中25℃培养时,混合菌HXDW生长最好。10mg/L P b2+明显促进复合菌的生长,而10mg/L的Cd2+和Mn2+抑制复合菌的生长。降解菌系只能利用乙草胺作为唯一碳源,而不能利用丁草胺、异丙甲草胺和吡氟酰草胺。利用LC-MS测定混合菌HXDW培养液中乙草胺的残留量,发现乙草胺的7d降解率为14%。利用UHPLC-QTOF-MS测定混合菌HXDW对乙草胺的代谢产物,初步断定乙草胺经羟基化、氧化、脱氯等过程形成中间产物3-羟基-2-氨基苯甲酸。SDS-PAGE电泳分析显示,经100mg/L乙草胺或100m g/L乙草胺与30mg/L苄嘧磺隆的复配剂诱导后,混合菌HXDW的全蛋白图谱出现3条约58.0、50.0和43.0kDa大小的特异性蛋白条带;而30mg/L苄嘧磺隆诱导的HXDW培养液全蛋白图谱呈现出80.0、64.0、58.0、50.0、43.0、38和25kDa等7条特异性的蛋白条带。通过渗透休克法提取混合菌HXDW胞内、周质空间及胞外粗酶液进行乙草胺的降解研究,结果表明24h的乙草胺降解率分别为17.43%、18.34%、44.95%,乙草胺降解酶主要来自复合菌的胞外酶,而胞内也存在少量的降解酶。当用乙·苄复配剂(20mg/L苄嘧磺隆和60mg/L乙草胺)胁迫敏感菌-大肠杆菌和枯草芽孢杆菌后,SOD酶活迅速下降,至处理后2h达到最低值;之后回升至处理后12h到达最高值,SOD酶活分别为处理前1.63倍和1.08倍。而大肠杆菌的C AT酶活曲线显示出两个峰值,最大值为处理前的1.23倍;枯草芽孢杆菌的CAT酶活在处理初期变化缓慢,处理18h时达到最高值,此时酶活为处理前的4.20倍。总体上,G-菌-大肠杆菌、G+菌-枯草芽孢杆菌经低浓度乙·苄复配剂胁迫后,可缓慢通过SOD酶和CAT酶的提高对抗氧化胁迫。而超过该浓度后,两菌株的CAT酶活显著降低,SOD酶活不变,表明高于60mg/L乙草胺及20mg/L苄嘧磺隆对敏感菌株造成损害。
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