环状RNA circEPB41L2在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌细胞增殖的影响

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目的:1)筛查膀胱癌组织与癌旁正常组织间差异表达的环状RNA(CircularRNAs,circRNAs)。2)验证circEPB41L2在人膀胱癌组织及细胞系中的表达情况,并分析circEPB41L2表达水平与患者临床病理特征之间的相关性。3)研究circEPB41L2对膀胱癌细胞增殖,细胞周期等生物学行为的影响。方法:1)收集104例膀胱癌患者手术中的膀胱癌组织和癌旁正常组织标本。采用CircRNA高通量测序检测12对膀胱癌组织及相应癌旁正常组织中的circRNAs表达谱,筛选差异表达的circRNAs并通过实时定量聚合酶链反应(quantitative realtime polymerase chain reaction,q RT-PCR)验证其表达水平。2)通过q RT-PCR检测104对膀胱癌及对应癌旁组织中circEPB41L2的表达水平,并分析临床病理特征与circEPB41L2表达量之间的关系。3)体外培养人膀胱癌细胞及正常膀胱上皮细胞,采用q RT-PCR检测circEPB41L2在膀胱癌细胞和膀胱上皮细胞中的表达。4)合成靶向circEPB41L2的siRNAs转染膀胱上皮细胞SV-HUC-1以特异沉默circEPB41L2的表达,通过q RT-PCR检测沉默效率并行细胞增殖实验;构建过表达circEPB41L2质粒转染膀胱癌细胞株5637和T24,q RT-PCR检测过表达circEPB41L2水平,并进行细胞增殖和细胞周期实验,采用蛋白质免疫印迹实验(Western Blot)检测细胞周期相关蛋白的表达。5)采用SPSS 26.0统计软件对实验数据进行分析。两组之间比较采用独立样本t检验,卡方检验或Fisher精确检验用以分析circEPB41L2的表达水平与临床病理参数的相关性。计量资料相关结果以均数±标准差(x±s)表示。p<0.05作为差异有统计学意义的标准。结果:1)通过高通量测序发现癌组织与癌旁组织比较,存在390个差异表达circRNAs,其中表达上调的有168个,表达下调的有222个。我们对表达存在显著差异的8个circRNAs在膀胱癌组织及癌旁组织行q RT-PCR验证,发现circEPB41L2表达下调最显著。2)q RT-PCR结果显示circEPB41L2在膀胱癌组织中表达量较癌旁组织显著降低(p<0.001)。统计学分析显示circEPB41L2在膀胱癌组织中表达水平与临床T分期(p=0.04)、病理分级(p=0.014)、肿瘤多发性(p=0.008)有关,与性别、年龄、肿瘤大小无明显相关性(p>0.05)。3)circEPB41L2在膀胱癌细胞株如5637、T24中较膀胱上皮细胞SV-HUC-1表达低(p<0.05)。4)circEPB41L2沉默后会显著促进膀胱上皮细胞SV-HUC-1的增殖能力;过表达circEPB41L2可明显抑制5637和T24细胞增殖(p<0.05),并诱导膀胱癌细胞G2期阻滞(p<0.01);Western Blot结果表明过表达circEPB41L2后,膀胱癌细胞中细胞周期相关蛋白p27表达明显升高。结论:1)circEPB41L2在膀胱癌组织及膀胱癌细胞株中呈低表达,并且其表达水平与膀胱癌病理分级、分期以及肿瘤多发性呈负相关。2)过表达circEPB41L2可明显抑制膀胱癌细胞增殖能力,并会影响细胞周期分布及细胞周期负调控蛋白p27的表达,提示circEPB41L2在膀胱癌细胞的增殖过程中发挥着重要的调控作用。
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