【摘 要】
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研究背景:牙周炎是局部刺激因素和细菌病原体沉积在牙周组织而引发的局部免疫炎症反应,导致牙槽骨不可逆性丧失,从而使牙齿逐渐松动、脱落。目前的基础治疗、药物治疗等方法仅能控制炎症,而无法将炎性吸收的牙槽骨恢复到原有的高度,手术方法可以部分恢复牙周附着,但是效果并不理想。引导组织再生术（guided tissue regeneration,GTR）利用生物膜将上皮细胞与骨组织隔开,引导成骨细胞在独立的空
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研究背景:牙周炎是局部刺激因素和细菌病原体沉积在牙周组织而引发的局部免疫炎症反应,导致牙槽骨不可逆性丧失,从而使牙齿逐渐松动、脱落。目前的基础治疗、药物治疗等方法仅能控制炎症,而无法将炎性吸收的牙槽骨恢复到原有的高度,手术方法可以部分恢复牙周附着,但是效果并不理想。引导组织再生术（guided tissue regeneration,GTR）利用生物膜将上皮细胞与骨组织隔开,引导成骨细胞在独立的空间内增殖分化。现有的成品可降解生物膜存在力学性能、降解性能不稳定的缺点,学者们为寻求一种性能理想的生物膜材料作了许多努力,目前尚无一种材料兼具良好的生物相容性、抑菌性能和理化性能。本课题组合成了一种RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖,利用京尼平交联成水凝胶,作为牙周GTR膜,探讨其临床应用价值。研究目的:本课题组前期已成功制备出RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖,其力学性能及黏附性能已得到验证。本研究旨在检测其作为牙周GTR生物膜的生物相容性、降解性能及抑制牙周致病菌的能力,为临床应用提供理论依据。研究方法:1、酰胺法制备邻苯二酚壳聚糖,配备0.5%、1%（m/v）壳聚糖、邻苯二酚水溶液,高温灭菌后,超净台内制备RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖,利用京尼平交联成胶,获得无菌的0.5%、1%浓度壳聚糖、邻苯二酚壳聚糖和RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖水凝胶。2、检测0.5%、1%浓度壳聚糖、邻苯二酚壳聚糖和RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖水凝胶20天内的降解率。3、制备0.5%、1.0%浓度壳聚糖、邻苯二酚壳聚糖和RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖水凝胶浸提液,培养L929细胞,在第24、72、120 h进行CCK-8检测。4、制备0.5%、1.0%浓度壳聚糖、邻苯二酚壳聚糖和RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖水凝胶,进行具核梭杆菌的MTT、抑菌环实验。研究结果:1、经红外光谱分析,成功合成邻苯二酚壳聚糖和RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖,利用京尼平交联,获得壳聚糖、邻苯二酚壳聚糖及RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖水凝胶。2、电镜下可见改性后的水凝胶孔隙大小更加均匀,邻苯二酚壳聚糖和RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖水凝胶的降解率均优于壳聚糖水凝胶。3、CCK-8结果分析显示,与空白对照组相比,在0.5%、1%的壳聚糖、邻苯二酚壳聚糖和RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖水凝胶浸提液中,24、72、120 h L929细胞生存率均表现出显著的优越性。1%邻苯二酚壳聚糖水凝胶组在24、72、120 h细胞生存率均高于1%壳聚糖水凝胶组,1%浓度的RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖水凝胶组在第5天的细胞生存率比1%邻苯二酚壳聚糖水凝胶明显增加。4、利用0.5%、1.0%浓度壳聚糖、邻苯二酚壳聚糖和RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖水凝胶和具核梭杆菌培养生物膜,在72 h后进行MTT检测,RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖水凝胶和邻苯二酚壳聚糖水凝胶中的活菌数表现出明显的减少趋势,1%浓度比0.5%浓度的壳聚糖、邻苯二酚壳聚糖和RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖水凝胶组比中的活菌数减少更明显。抑菌环实验中,改性的水凝胶周围形成了更明显、范围更广的抑菌环,1%浓度比0.5%壳聚糖、邻苯二酚壳聚糖和RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖水凝胶形成的抑菌环直径更大。研究结论:本研究证实了RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖水凝胶相比壳聚糖、邻苯二酚壳聚糖具有更优越的理化性能、生物相容性及对牙周致病菌抑制作用,因此RADA16-RGD改性的邻苯二酚壳聚糖可以作为牙周引导再生的GTR膜,进行下一步应用研究。
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