【摘 要】
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肌球蛋白X(Myosin X,Myo X)是重要的细胞内分子马达,现有的研究表明在神经发育系统中Myo X调节神经突起的生长,调节丝状伪足的稳定,从而提高细胞的游走性,并且在BMP6信号途径
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肌球蛋白X(Myosin X,Myo X)是重要的细胞内分子马达,现有的研究表明在神经发育系统中Myo X调节神经突起的生长,调节丝状伪足的稳定,从而提高细胞的游走性,并且在BMP6信号途径中起着重要的作用。而本文是在体外研究Myo X对乳腺癌细胞系降解细胞外基质和侵袭能力的影响。
通过对两株转移能力不同乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231进行Realtime-PCR和Western Blot在mRNA和蛋白水平上检测Myo X的表达,结果显示,在高侵袭能力的MDA-MB-231细胞中Myo X高表达,预示Myo X可能与肿瘤侵袭能力有关。
高侵袭的MDA-MB-231细胞能形成侵入性伪足降解细胞外基质,这种伪足是导致恶性肿瘤侵袭性生长的关键结构。Cortactin是侵入性伪足的关键蛋白,与肿瘤的侵袭和转移都有关。通过标记内源性Myo X与cortactin,发现在乳腺癌细胞的细胞质、丝足和周边共定位。通过对细胞外基质降解的研究,发现Myo X在侵入性伪足中定位,为进一步研究Myo X在肿瘤侵袭过程中的作用打下了基础。
为了深入的了解Myo X在肿瘤侵袭过程中的作用,构建了慢病毒包装的沉默载体Myo X-shRNA,在HEK293FT细胞中包装慢病毒,分离纯化病毒,检测其滴度达107TU/ml。通过慢病毒反复侵染MDA-MB-231细胞,转染MDA-MB-231细胞效率达到90%以上,然后进行Matrigel侵袭能力分析,发现沉默Myo X后肿瘤细胞的侵袭能力降低58.9%。上述结果说明,Myo X与细胞外基质降解以及肿瘤侵袭有着密切的联系。
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