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小反刍兽疫病毒(PPRV)属于副黏病毒科麻疹病毒属,主要感染山羊和绵羊等小反刍动物,具有较高的发病率和死亡率,世界动物卫生组织(OIE)将其列为法定报告的疾病,我国列为I类动物传染病。近年来小反刍兽疫在我国频频发生,对畜牧业的发展造成严重威胁,该病主要以免疫预防为主,因此准确检测免疫抗体对于防控该病非常重要。以筛选的PPRV H蛋白B细胞表位为基础,选择反应原性较好的4段抗原表位串联后合成作为包被抗原,建立针对H蛋白抗体的iELISA检测方法,并对相关条件进行优化。经优化后,多表位抗原肽的最佳包被浓度为1.5ⅹ10-6μg/孔,待检血清阴阳性临界稀释浓度为1:100,酶标二抗最佳稀释浓度为1:80000;对反应中各种缓冲液进行筛选:包被液为碳酸盐缓冲液;血清和二抗稀释液均为PBST溶液,封闭液为2%BSA溶液;本试验在阳性对照OD450≥0.5、阴性对照OD450<0.25的基础上,血清样品的判定标准为:OD450<?X+2S=0.25为阴性,OD450≥?X+3S=0.30判为阳性,0.25≤OD450<0.30为可疑。批内及批间检测结果变异系数均小于10%,检测羊痘、口蹄疫、蓝舌病阳性血清均为阴性,说明该方法具有良好的稳定性和特异性。与法国ID-Vet公司生产的PPRV cELISA试剂盒对比检测,符合率为92.75%。PPRV P蛋白为高度磷酸化蛋白,与N蛋白相互作用不仅可对病毒的转录和复制起调控作用,还可对细胞周期起到调控作用。对PPRV蛋白功能和胞内蛋白进行研究,可进一步明确P蛋白在病毒的转录、复制中的具体作用机制和病毒对细胞周期的调控机制。通过构建与His标签融合表达的PPRV P蛋白表达载体,纯化得到P蛋白;利用Pull-down/MS对细胞内与P蛋白存在潜在相互作用的蛋白进行筛选,结果发现有60种细胞蛋白可能与PPRV P蛋白相互作用,其中14种细胞蛋白得分高于40分;构建与Flag标签融合表达的P蛋白表达载体并转染细胞,间接免疫荧光和Co-IP试验进一步验证P蛋白与胞内蛋白Vimentin的相互作用,结果证实两者之间确实可以相互作用。利用小干扰RNA(siRNA)干扰Vimentin表达后进行病毒感染,然后利用间接免疫荧光、Western Blotting和qPCR检测Vimentin下调表达对病毒复制的影响,结果显示,Vimentin蛋白下调时,病毒N基因水平升高,但N蛋白表达量则降低,该结果说明Vimentin蛋白可促进病毒蛋白的表达,但对病毒基因组RNA的复制具有抑制作用。