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目的:本研究以宫颈癌Caski细胞为研究对象,分析ANXA2在EGF诱导的EMT过程中发挥的作用及其机制,以及miR-155对ANXA2上述功能的影响,以进一步评估ANXA2和miR-155作为宫颈癌早期侵袭转移指标的潜在价值。 方法:(1)EGF处理人宫颈癌细胞 Caski,检测其对细胞形态、增殖和侵袭转移的影响,及ANXA2表达量的改变;(2)构建重组质粒pcDNA3.1(+)/ANXA2、pcDNA3.1(-)/miR-155,并且筛选稳定高表达ANXA2细胞株;(3)MTT法观察克隆细胞生长状况,流式细胞术检测细胞周期的改变;(4)细胞划痕、Transwell试验检测ANXA2高表达对Caski细胞迁移能力的影响,Western blot检测E-Cad的表达;(5)构建质粒pcDNA3.1(-)/miR155并瞬转Caski细胞,然后用上述方法测定miR-155高表达对细胞增殖、细胞周期,细胞迁移和E-Cad表达的影响。 结果:(1)与未做任何处理的Caski细胞相比,EGF处理后Caski细胞表现出典型的间质细胞样形态:细胞梭形或细长形,细胞与细胞之间连接松散。Western blot结果提示EGF下调E-Cad的表达,上调N-Cad的表达。FCM结果显示EGF能促进细胞生长,EGF处理48h后更多的细胞出现在S期(Caski细胞21.5％,Caski/EGF29.7%)和G2/M期(Caski细胞7.6%,Caski/EGF13.3%),而G0/G1其细胞明显减少(Caski细胞70.9%,Caski/EGF56.9%)。(2)EGF诱导的EMT过程伴随ANXA2表达量明显增加,且呈剂量和时间依赖性。(3)稳定克隆细胞Caski/ANXA2比Caski、Caski/pcDNA3.1(+)细胞表现出更高的增殖潜能(P<0.05),而Caski与Caski/pcDNA3.1(+)细胞增殖率之间无明显差异。高表达ANXA2使处于S期和G2-M期的Caski细胞明显升高,而处于G0/G1期的细胞明显下降(P<0.05),提示上调ANXA2促进Caski细胞生长。(4)高表达ANXA2显著性下调E-Cad表达水平,而miR-155高表达能逆转ANXA2对E-Cad表达的抑制性影响。这些结果表明,ANXA2促进EMT进程,而miR-155作用相反。(5)Caski/ANXA2细胞的侵袭和转移能力明显高于Caski和Caski/pcDNA3.1(+)细胞。而Caski细胞和Caski/pcDNA3.1(+)细胞的侵袭转移能力之间无明显差别。高表达miR-155能逆转ANXA2对Caski细胞转移能力的影响。这些结果显示miR-155抑制ANXA2诱导的Caski细胞转移。 结论:(1)体外EGF能诱导Caski细胞发生EMT,并表现出更高的增殖潜能。(2) EGF诱导EMT过程伴随着ANXA2的高表达。(3)稳定高表达ANXA2明显促进细胞增殖、侵袭和转移。(4) ANXA2诱发细胞的恶性特征可被mir-155部分逆转。上述结果提示,ANXA2和miR-155有作为宫颈癌早期侵袭转移指标的潜在价值。