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研究背景和目的肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全球最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率在发达国家及发展中国家均呈上升趋势。肝细胞癌的发生发展是一个多因素、多水平、多步骤的发病过程,受环境因素、病毒感染、宿主遗传变异等多种因素的影响。其中慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是HCC最重要的危险因素,我国约85%~90%的HCC都与乙型肝炎病毒感染有关。目前由于缺乏早期诊断和有效的治疗措施,HCC患者的预后欠佳,五年生存率水平较低。因此探索HCC发生发展的分子病理机制以及寻找有效地治疗靶点具有重要的意义。UBE2L3(Ubiquitin-conjugating enzyme E2L3)也称UbcH7,属于泛素结合酶E2,参与蛋白质的泛素化过程,介导c-Fos,p53,NF-kB前体p105的体外泛素化降解,并与类风湿性关节炎、克罗恩病、系统性红斑狼疮和银屑病性关节炎等多种自身免疫性疾病相关。近期全基因组关联研究表明UBE2L3是慢性HBV感染的遗传易感基因,慢性HBV感染作为HCC最重要的危险因素,其易感基因对HBV相关HCC的作用及意义有待研究;因此本次实验通过大样本多中心的病例对照研究,分析了UBE2L3遗传变异与HBV相关HCC易感性的相关性,并通过动物模型试验、临床肝癌组织样本分析、肝癌细胞体外生物学特性检测进一步探讨了UBE2L3在肝癌发生发展中的作用及机制。研究方法1.通过大样本多中心的病例对照研究,分析了UBE2L3遗传变异与HBV相关HCC易感性的相关性。2.根据癌症基因图谱(TCGA)和临床肝癌样本组织芯片信息,研究了UBE2L3的表达水平与肝癌恶性度及生存率的关系。3.利用免疫组织化学技术检测临床肝癌标本中UBE2L3的表达水平,利用Western-Blot和RT-PCR实验检测人肝癌细胞中UBE2L3的表达情况。4.通过CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞的体外增殖能力,利用Transwell小室实验检测细胞的体外迁移能力。5.利用慢病毒载体构建稳定敲低UBE2L3的肝癌细胞株,通过RNA测序研究UBE2L3敲低对肝癌发生发展的影响。研究结果1.UBE2L3的遗传变异与HCC和慢性HBV感染相关。2.UBE2L3在临床肝癌组织中的表达明显地较其癌旁正常组织高,并且UBE2L3的表达与肿瘤分级呈现正相关,即肿瘤分级越高,UBE2L3的表达越高;此外UBE2L3高表达的肝癌患者有着较差的预后生存率。3.体外实验表明,敲低UBE2L3能够降低肝癌细胞的增殖和迁移能力,而过表达UBE2L3能够增加肝癌细胞的增殖和迁移能力。4.UBE2L3能够通过调控EMT过程,负调控CLDN1和CDKN2B两个抑癌基因促进肝癌的发生发展。