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漆酶(laccase EC 1.10.3.2)又名酚酶,多铜氧化酶,在植物、真菌以及昆虫的组织器官中均有发现,在部分细菌及高等动物中也可产生漆酶或漆酶类似物。漆酶对于各种不同结构的天然及合成化学物质,都具有的强大降解能力,同时反应的副产物只有水,也被称为“绿色酶类”。目前所有产漆酶的生物体中,真菌被认为分泌效率最高,且催化效率最好。漆酶在各个领域都有着极大的实际应用价值,但是目前漆酶产量低,价格昂贵。另外不同来源的漆酶其酶学特性及催化能力均有不同,对不同降解底物的催化特异性也有较大差异。因此,一方面提高漆酶产量,降低生产成本成为当今研究的热点,同时寻找和开发新的漆酶资源也具有重要意义。本论文采用一种简单的真菌分离方法,从枯败的植物材料中直接分离,获得一株漆酶产生菌。经ITS测序分析和形态观察,该菌与云芝属(Trametes)物种高度相似,将其命名为Trametes sp.MA-X01。在液体培养基中添加铜离子和芳香族化合物可以诱导该菌漆酶合成,铜离子对漆酶活性的影响呈现剂量依赖性,在培养基中添加终浓度2.5mM的铜离子获得最大漆酶活性2138.9±340.2U/L,约为对照组最大漆酶活性的7倍;不同芳香族化合物的诱导作用不同,添加香兰素或香草酸,发酵液中最大漆酶活性分别达981.6±77.2U/L和1007.9±59.5U/L,分别为对照组最大漆酶活性的3.4和3.5倍。对Trametes sp.MA-X0 1产漆酶的酶学性质进行研究,结果显示,在液体培养条件下Trametes sp.MA-X01所产漆酶的分子量约为62kDa。该酶属于高温反应酶,最适反应温度60℃,在pH 3.0-4.5的范围内均表现出较好的酶活性。Mg2+、Mn2+、Zn2+、Cu2+可以促进酶反应;β-巯基乙醇、L-半胱氨酸、二硫苏糖醇(DTT)对酶活有强烈的抑制作用。在不添加反应介体的条件下,Trametessp.MA-X01产漆酶对不同种类的染料均有较好的降解能力,但降解能力差异较大。偶氮类染料中对伊文思蓝的降解作用较强,48h降解率超过80%,对台盼蓝、橙黄等的降解率均超过50%,但对二甲基黄的降解率只有5%。在杂环类染料中虎红钠盐和偶氮胭脂红B在48h的降解率超过50%,番红花红T、荧光素等染料48h降解率超过40%。在三苯甲烷类染料中,对孔雀石绿48h的降解率超过85%,甲基绿和亮绿SF的降解率在75%左右。该酶对普鲁士蓝的48h降解率在40%左右,说明(CN-)也可以作为该酶的催化底物。选择3种类型6种染料为研究对象,分别是偶氮类染料伊文思蓝、酸性铬蓝K,杂环类染料酸性红94、碱性红2,三苯甲烷类染料亮绿SF、孔雀石绿,初步探讨不同反应条件对脱色率的影响。结果表明,在相同的条件下,反应体系中加入介体ABTS可以提高脱色效率;反应温度40℃时的脱色效果最好。在反应的前3h具有较高的脱色速率,但该酶对不同染料的降解能力不同,整体的脱色效果为三苯甲烷类>偶氮类>杂环类。提高给酶量对三苯甲烷类染料(孔雀石绿和亮绿SF)的脱色效果影响较小,给酶量由1U提高到5U,脱色率提高10%,对于两种杂环类染料(酸性红94和碱性红2),给酶量由1U提高到5U,染料脱色率分别提高51%和40%。对于脱色率较高的几种染料,伊文思蓝、孔雀石绿、亮绿SF,染料浓度对于脱色率几乎没有影响,而对于脱色率较低的几种染料,随着反应液中染料浓度的增加,脱色率逐渐降低。