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四方藤(CissusPteroclada Hayata)为葡萄科(Vitaceae)白粉藤属(CissusLinn)植物,在中国主要分布于广西、海南等华南省份,其性酸、涩、甘、平,具有活血散瘀、祛风湿、舒筋络、消炎等功效,在民间广泛用于治疗风湿痹痛、腰肌劳损、外伤、止血等,且疗效显著。本文以四方藤为原料,对其中高极性部位的化学成分进行分离与结构鉴定;应用响应面法优化四方藤总多酚的提取工艺;对小鼠B16黑色素瘤细胞中黑色素的生成抑制效果与机制的初步研究。1、利用柱层析、制备液相、中压制备液相提取分离技术,从四方藤的乙酸乙酯以及正丁醇部位分离获得25个化合物。利用核磁共振波谱等手段解析出21个化合物的结构,其中化合物3、化合物5为首次从该植物中分离。25个化合物分别为:豆甾醇(1)、β-谷甾醇(2)、正十二烷酸(3)、蒲公英赛酮(4)、欧前胡素(5)、鞣花酸(6)、β-胡萝卜素(7)、齐墩果酸(8)、白芦藜醇(9)、白芦藜醇苷(10)、11-O-没食子酰岩白菜素(12)、11-0-对羟基苯甲酰岩白菜素(13)、岩白菜素(14)、(7E,9Z)-dihydrophaseic acid 3-Oβ-D-glucopyranoside(15)、岩白菜素-1 1-O-α-D-吡喃半乳糖苷(16)、正十六烷酸(19)、没食子酸(20)、没食子酸乙酯(21)、没食子酸甲酯(22)、杨梅苷(24)、芦丁(25)。2、响应面法对四方藤总多酚的提取工艺进行优化。以四方藤总多酚的提取率为评价指标,在单因素试验的基础上,采用响应面法考察乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度对总多酚提取率的影响,优选出最佳提取工艺条件。优选得到的总多酚最佳工艺参数为乙醇浓度80%,料液比1:25,提取时间2.4 h,提取温度100℃,在此工艺条件下,总多酚的提取率为0.807%。实验结果表明,响应面法对四方藤总多酚的提取条件优化合理可行,为提高总多酚的提取率提供了一定理论依据和实验指导。3、采用小鼠B16黑色素瘤细胞作为模型,以B16黑色素瘤细胞的增殖率、B16黑色素瘤细胞中酪氨酸酶活性、B16黑色素瘤细胞中黑色素含量、B16黑色素瘤细胞中活性氧含量、B16黑色素瘤细胞中还原性谷胱甘肽的含量以及B16黑色素瘤细胞中酪氨酸酶的表达来探究四方藤粗提物以及单体化合物对小B16黑色素瘤细胞内黑色素生成的影响。从四方藤粗提物以及单体化合物中筛选出抑制小鼠B16黑色素瘤细胞中黑色素的生成效果最佳活性成分:四方藤醇提物al以及化合物10。