论文部分内容阅读
研究目的:本研究的目的是为了明确miR-222-3p在肾细胞癌中的表达情况,明确mi R-222-3p对肾癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用,并阐明mi R-222-3p表达与肾癌患者预后的关系。研究方法:本研究收集了28对新鲜肾癌组织标本和癌旁正常肾组织,通过RT-q PCR测定mi R-222-3p在新鲜肾癌组织及癌旁正常肾组织中的表达。本研究进一步分析了mi R-222-3p在肾癌细胞系(ACHN,786?O,Caki?1和769?P)中的表达情况。为明确mi R-222-3p在肾癌中的作用,本研究选择了ACHN和786?O两种细胞系进行后续实验。本研究通过瞬时转染使肾癌细胞中的mi R-222-3p过表达或者被敲低,通过CCK-8实验检测mi R-222-3p对肾癌细胞增殖的影响。应用划痕实验和Transwell实验检测mi R-222-3p对肾癌细胞迁移和侵袭的影响,应用流式细胞术检测mi R-222-3p对肾癌细胞凋亡的影响。为明确mi R-222-3p与肾癌患者预后的关系,本研究通过RT-q PCR检测42例肾癌患者石蜡标本中mi R-222-3p的表达量,分别通过单因素和多因素两个方面分析了mi R-222-3p与肾癌患者临床病理特征和总生存期之间的关系。此外,本研究通过star Base v2.0数据库、GEPIA数据库和Kaplan Meier plotter数据库预测了mi R-222-3p的潜在靶基因。结果:实时荧光定量PCR结果显示,mi R-222-3p在肾癌组织中的表达明显高于癌旁正常肾组织。同样的,mi R-222-3p在肾癌细胞系中的表达量明显高于正常人肾小管上皮细胞系HK-2。进一步的细胞实验表明,mi R-222-3p对肾癌细胞的增殖无明显影响;miR-222-3p的过表达促进了786?O细胞的迁移和侵袭,并减弱其凋亡;而敲低miR-222-3p则抑制了786-O细胞的迁移和侵袭,并诱导其凋亡。同样的,在ACHN细胞系中,miR-222-3p过表达促进了ACHN细胞的迁移和侵袭,并减弱其凋亡;而敲低miR?222?3p则抑制了ACHN细胞的迁移和侵袭,并诱导其凋亡。为了明确mi R-222-3p表达情况与肾癌患者预后的关系,本研究通过实时荧光定量PCR检测42例甲醛固定石蜡包埋的肾癌标本,用中位数将患者分为低表达组和高表达组,并分析了miR-222-3p的表达水平与肾癌患者的临床病理特征和总生存率之间的关系。结果表明,与miR-222-3p低表达组的患者相比,miR-222-3p高表达组的患者的总生存期显着降低[风险比(HR)=5.120;P=0.036]。多因素分析表明,与miR-222-3p低表达组的患者相比,miR-222-3p高表达组的患者总生存期在统计学上显着降低(HR=5.636;P=0.030)。此外,Kaplan?Meier生存曲线表明,与miR-222-3p低表达组的患者相比,miR-222-3p高表达组的患者的总生存率明显降低(P=0.020)。通过生物信息学分析,我们发现,SNX4、ARNT和FNDC3A与mi R-222-3p表达呈显著负相关关系。这三个基因在肾癌中低表达,且与患者预后不佳相关,可能是mi R-222-3p的靶基因。结论:miR-222-3p在肾癌组织中表达明显高于癌旁正常肾组织。mi R-222-3p在肾癌细胞中发挥致癌基因的作用,可以促进肾癌细胞迁移、侵袭,抑制其凋亡。mi R-222-3p高表达与肾癌患者预后不佳相关,是肾癌的潜在预后生物标志物和治疗靶标。