人源噬菌体抗体库的构建及抗Aβ寡聚体抗体的筛选

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阿尔兹海默氏症是一种神经退行性疾病,其主要病理变化为Aβ形成的神经细胞外的淀粉样斑块和Tau形成的神经元纤维缠结,最近的研究发现由Aβ(1-42)聚合而成的小分子量的Aβ寡聚体可能是Aβ造成神经元损伤的重要原因,在疾病动物模型或AD病人中使用被动免疫治疗可以有效地清除Aβ各级聚合物并达到改善认知功能的作用。但由于异源抗体的AAR(Anti-Antibody Reaction)的存在,制备全人抗体就成了一种重要的解决途径。我们首先在体外合成了Aβ(1-42)寡聚体,同时采集6个AD病人的血液样品,提取总鼢RNA,进行RT-PCR,将免疫球蛋白重,轻链V区和C1区基因扩增出来,克隆入噬菌粒载体中,分别构建了四个次级库和一个同时接有重、轻链基因的Fab库,M13K07超感染后生成Fab型噬菌体抗体库。通过结合-洗脱-扩增过程对Fab型噬菌体抗体库进行筛选。得到可与Aβ寡聚体特异性结合的人源化抗体。为后续研究奠定了基础,希望能为临床诊断及治疗提供帮助。
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