肠道微生物数量和种类可以影响宿主体脂沉积,而硬壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes)是哺乳动物肠道中的主要菌群。本试验采用不同抗菌谱的抗生素(恩拉霉素和硫酸粘杆菌素)以及银耳孢子发酵物(TFS)来调控肠道菌群,考察不同微生物调节剂对猪不同部位脂肪沉积的影响;并在体脂沉积有差异的基础上进一步检测盲肠内容物中与体脂沉积有关的硬壁菌门、拟杆菌门和双歧杆菌属数量,分析硬壁菌门与拟杆菌门比值与体脂沉积的关系:随后进一步考察抗生素和银耳孢子发酵物对猪肠道微生物代谢产物、血液生化指标以及脂肪代谢相关基因表达的影响,初步探讨肠道微生物影响体脂沉积的作用途径。研究包括以下三个部分:　　 试验一、恩拉霉素、硫酸粘杆菌素和银耳孢子发酵物对猪生产性能和胴体品质的影响　　 为研究肠道微生物与体脂沉积的关系,本试验考察恩拉霉素(对革兰氏阳性菌(G+)敏感)、硫酸粘杆菌素(对革兰氏阴性菌(G-)敏感)和银耳孢子发酵物对猪体脂沉积的影响,建立不同体脂沉积的动物模型。将10.01±0.54 kg DLY仔猪40头分到5个处理,每个处理8个重复,每个重复1头猪。5个处理组分别为对照组(C组,不加抗生素),恩拉霉素组(E组),硫酸粘杆菌素组(CS组),抗生素合用组(E+CS组,恩拉霉素+硫酸粘杆菌素)和银耳孢子发酵物组(TFS组)。试猪达lOOkg时称重,记录试验总天数以及总采食量;每组屠宰5头试猪,测定背膘厚度、眼肌面积、板油重和肌内脂肪含量。结果表明,恩拉霉素和硫酸粘杆菌素单独作用以及合用对10～100kg阶段猪生产性能均无显著影响,而银耳孢子发酵物提高试猪生产性能。恩拉霉素显著提高试猪平均背膘厚(P＜0.05),有提高板油重以及降低肌内脂肪含量的趋势(P＞0.05),对眼肌面积无显著影响(P＞0.05);硫酸粘杆菌素和两种抗生素合用有降低平均背膘厚和板油重,提高眼肌面积的趋势,但差异不显著(P＞0.05)。抗生素组间,恩拉霉素组平均背膘厚以及板油重显著高于硫酸粘杆菌素组和两种抗生素合用组(P＜0.05)。银耳孢子发酵物组除眼肌面积显著高于对照组和恩拉霉素组外,其余胴体指标与各处理组均无显著差异。以上结果表明分别对G+和G-敏感的恩拉霉素和硫酸粘杆菌素对体脂沉积造成相反的结果,恩拉霉素组试猪体脂沉积高于硫酸粘杆菌素组和两种抗生素合用组,而银耳孢子发酵物对猪体脂沉积无显著影响。　　 试验二、恩拉霉素、硫酸粘杆菌素和银耳孢子发酵物对猪肠道微生物的影响　　 本试验在试验一证明恩拉霉素、硫酸粘杆菌素和银耳孢子发酵物对猪体脂沉积造成不同影响的基础上,进一步检测肠道微生物的差异,分析肠道菌群与体脂沉积的关系。试验设计和试验动物同试验一,屠宰时无菌收集盲肠食糜,用于测定盲肠内容物中硬壁菌门、拟杆菌门、双歧杆菌属和总细菌的数量。本试验采用根据细菌16S rDNA基因序列的实时荧光定量PCR方法测定以上菌群,首先需要构建重组质粒以及标准曲线。结果表明恩拉霉素显著提高硬壁菌门占总细菌的比例以及硬壁菌门与拟杆菌门的比值(P＜0.05);硫酸粘杆菌素以及两种抗生素合用有提高拟杆菌门占总细菌比例以及降低硬壁菌门与拟杆菌门比值的趋势(P＞0.05),其中抗生素合用对拟杆菌门占总细菌比例的提高达到显著水平(P＜0.05);银耳孢子发酵物极显著提高双歧杆菌属和拟杆菌门占总细菌的比例,有降低硬壁菌门占总细菌的比例以及硬壁菌门与拟杆菌门比值的作用(P＜0.05)。肠道菌群与体脂沉积指标相关性分析结果表明,恩拉霉素和硫酸粘杆菌素作用下,硬壁菌门/拟杆菌门与平均背膘厚和板油重呈正的线性关系,拟杆菌门占总细菌比例与平均背膘厚和板油重呈负的线性关系(P＜0.01),但加入银耳孢子发酵物组的结果后,硬壁菌门和拟杆菌门比例与体脂沉积无相关关系。以上结果表明,恩拉霉素提高硬壁菌门比例,硫酸粘杆菌素提高拟杆菌门比例,与其抗G+和G-的抗菌谱相反,且在不同抗菌谱抗生素作用下硬壁菌门和拟杆菌门比例与体脂沉积呈正相关;银耳孢子发酵物作用下,低肠道硬壁菌门和拟杆菌门比例并未伴随体脂沉积的降低。　　 试验三、恩拉霉素、硫酸粘杆菌素和银耳孢子发酵物对猪肠道微生物代谢产物、血液生化指标以及脂肪代谢相关基因表达量的影响　　 为了进一步证明肠道微生物与体脂沉积的关系,并初步探讨微生物影响体脂沉积的作用途径,本试验在试验二的基础上考察恩拉霉素、硫酸粘杆菌素和银耳孢子发酵物对猪肠道微生物代谢产物、血液生化指标以及脂肪代谢相关基因表达量的影响。在试验一试猪达20、50和100kg体重时前腔静脉采血,用于测定脂质、葡萄糖、胰岛素、瘦素以及脂多糖(L,PS)水平,并在100kg屠宰时收集盲肠内容物用于测定挥发性脂肪酸(VFAs)浓度,同时采集回肠、皮下脂肪组织、眼肌和肝脏样品用于测定脂肪代谢相关基因的表达量。试验结果表明不同肠道微生物调节剂对微生物代谢产物的影响不同,表现在银耳孢子发酵物对盲肠内容物中VFAs浓度的降低程度小于恩拉霉素,更小于硫酸粘杆菌素和两种抗生素合用;恩拉霉素组乙酸比例低于硫酸粘杆菌素组和两种抗生素合用组,而丙酸和丁酸的比例均高于后者;恩拉霉素提高血浆LPS水平(P＜0.01),硫酸粘杆菌素、两种抗生素合用以及银耳孢子发酵物对其无显著影响。不同肠道微生物调节剂对血清葡萄糖和激素水平的影响程度不同,恩拉霉素有提高血清葡萄糖、胰岛素、瘦素水平的趋势,硫酸粘杆菌素和两种抗生素合用对以上指标有降低的趋势。不同微生物调节剂对血脂的影响程度不同,表现在银耳孢子发酵物对血清甘油三酯的降低程度低于恩拉霉素,更低于硫酸粘杆菌素和两种抗生素合用;恩拉霉素有提高血清总胆固醇的趋势,硫酸粘杆菌素有降低该值的趋势,抗生素合用和银耳孢子发酵物对其无显著影响。不同微生物调节剂对皮下脂肪中脂肪代谢相关基因的表达量不同,银耳孢子发酵物和恩拉霉素提高皮下脂肪组织中脂肪合成相关基因的表达量,而硫酸粘杆菌素和两种抗生素合用对其无显著影响。不同微生物调节剂对肌肉中脂肪代谢相关基因的表达量不同,恩拉霉素降低肌肉脂肪合成相关基因的表达量,硫酸粘杆菌素对大部分脂肪合成基因无显著影响,抗生素合用和银耳孢子发酵物提高脂肪分解基因的表达量。不同微生物调节剂对肝脏中脂肪代谢相关基因的表达量不同,银耳孢子发酵物和恩拉霉素降低肝脏中脂肪合成相关基因的表达量,而硫酸粘杆菌素和两种抗生素合用的结果均与恩拉霉素相反。由此可见,恩拉霉素和硫酸粘杆菌素作用下,盲肠内容物中丁酸比例、血清葡萄糖、胰岛素和瘦素水平与盲肠内容物中硬壁菌门和拟杆菌门比例以及体脂沉积的变化规律一致;银耳孢子发酵物对微生物代谢产物无显著影响,可能通过非肠道微生物途径影响脂质代谢。　　 综上所述,本研究结果表明:　　 1)恩拉霉素和硫酸粘杆菌素作用下,硬壁菌门和拟杆菌门比值与体脂沉积呈正相关关系,拟杆菌门占总细菌比例与体脂沉积呈负相关关系。　　 2)恩拉霉素抑制的G+和硫酸粘杆菌素抑制的G-不能代表硬壁菌门和拟杆菌门反应肠道微生物与体脂间的关系。　　 3)银耳孢子发酵物作用下,猪盲肠内容物中硬壁菌门与拟杆菌门比值与体脂沉积无相关关系。　　 4)恩拉霉素和硫酸粘杆菌素作用下,盲肠内容物中丁酸比例、血清葡萄糖、胰岛素和瘦素水平与盲肠内容物中硬壁菌门和拟杆菌门比例以及体脂沉积的变化规律一致。