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背景:结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)是最常见的致死性肺外结核之一,在结核病中的发病率为10%-20%,死亡率为15%-30%,致残率和致死率高。其预后与早期诊断从而早期治疗有密切关系。结核性脑膜脑炎的诊断目前大多数依赖于临床表现和影像学检查,由于临床表现不具有典型特诊,基本上无法确诊。目前最常用的针对结核病的主要诊断手段有以下几种:脑组织活检、病毒分离、聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、免疫学试验、结核分枝杆菌培养、抗酸染色等。但他们具有共同的缺陷:方法灵敏度低,缺乏特异性,耗费较高,耗时较长,很难被临床一线应用。脑脊液细胞学检查作为神经内科的一项常规检查,因其设备要求低,价格合理,操作流程简单,结果可靠,对结核性脑膜炎的诊断具有重要辅助意义。对确诊结核性脑膜炎的患者脑脊液细胞学进行分析有助于提高对脑脊液细胞学诊断结核性脑膜炎的认识。但是由于传统脑脊液抗酸染色和结核杆菌培养的阳性率较低,因此既往进行脑脊液细胞学研究的结核性脑膜炎患者主要依赖临床诊断和对结核药物的反应性作为参考诊断标准,从而难以对脑脊液细胞学的诊断意义进行明确评估。Bactec MGIT960系统是新近发明的结核杆菌快速培养方法,是结核分枝杆菌的培养、鉴定和一线药敏试验的“金标准”,与传统罗氏(L-J)培养法比较,更为敏感且培养时间更短,成为目前临床最有效的结核确诊方法之一。使用Bactec MGIT960系统对结核分枝杆菌培养可以明显提高确诊结核性脑膜炎的比例。本课题收集了2010年9月至2011年12月陕西省23家医院送往第四军医大学西京医院检验科细菌室使用Bactec MGIT960系统脑脊液结核杆菌培养阳性并于神经内科脑脊液细胞学室行脑脊液检查的37例患者的临床资料,对其脑脊液细胞学及传统和改良抗酸染色检查结果加以分析,研究脑脊液细胞学诊断结核性脑膜炎的临床意义。方法:1. Bactec MGIT960结核培养Bactec MGIT960全自动分枝杆菌培养/药敏系统由美国BD公司生产。将脑脊液按照MGITTMProcedure Manual要求进行培养。培养结果通过PCR进行确定。2.脑脊液细胞学检测方法留取新鲜脑脊液标本,根据不同细胞数,取100-500μ1脑脊液,采用以我科老前辈粟秀初教授研发的FMU-5为基础而进一步改进的FMU-6微型细胞玻片离心沉淀器进行(500转/分),低速离心,时间一般控制在2-5min,然后应用May-Grunwald Giems(aMGG)染色将收集有细胞的玻片进行染色,约待干燥后,应用光学显微镜,调整在油镜下进行细胞学计数和分类。3.改良抗酸染色留取新鲜脑脊液标本,加到用多聚赖氨酸处理过的玻片上,离心沉淀1000g,5-10min;4%多聚甲醛固定(PH7.4)10min,室温;0.3%TritonX-100浸泡30min;再用含有0.3%TritonX-100石炭酸复红染料染色15min,酸性酒精脱色,美蓝复染5min,显微镜下观察。结果:Bactec MGIT960系统显著增加了结核性脑膜炎患者脑脊液结核分枝杆菌培养阳性率,确诊结核性脑膜炎患者的脑脊液细胞呈混合细胞反应是典型的脑脊液细胞学特征,其中多数患者(约60%)表现为淋巴细胞为主型,也有1/3左右为中性粒细胞为主。发病后1周确诊的结核性脑膜炎患者脑脊液白细胞总数最高,而在其后时间点确诊的结核性脑膜炎患者脑脊液白细胞数大致相当。在确诊结核性脑膜炎患者的脑脊液内存在着浆细胞,并且在三周以后明显增高。这可能提示结核性脑膜炎慢性转换的过程。37例确诊结核性脑膜炎患者,传统抗酸染色8例阳性,而改良抗酸染色37例阳性。对于8例传统和改良抗酸均为阳性的患者,改良抗酸染色处理脑脊液的抗酸杆菌阳性视野数高于传统抗酸染色。且改良抗酸染色处理后,除了见到细胞外游离的结核分枝杆菌以外,还在中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞内检测到结核分枝杆菌的存在。随着结核培养和抗酸染色方法的改进,越来越多的结核性脑膜炎患者得以生物学确诊,对这些确诊病例的分析有助于我们更进一步的理解结核性脑膜炎的发病机制和临床特点。结论我们研究发现,改良抗酸染色法极大的提高了脑脊液抗酸杆菌的检出率;首次发现脑脊液胞内寄生的结核菌;首次发现淋巴细胞具有吞噬结核菌功能;改良抗酸染色法方法简单、快速、高效,基层医院即可开展改良抗酸染色法可替代传统抗酸染色法。