论文部分内容阅读
本实验以桑树枝条韧皮部(简称桑枝皮)为材料,高效制备桑枝皮醇提物,利用大孔树脂的吸附作用,通过水和醇水溶液的梯度洗脱,在这种桑枝皮醇提物中获得30%醇水溶液洗脱组分后,再利用半制备HPLC-DAD技术从该组分中提取出醇水相中的主要活性单体成分,经LC-MS、1H和13C NMR谱鉴定为桑皮苷A,即氧化白藜芦醇3-4’--D-二葡萄糖苷(简称氧化白藜芦醇二糖苷或Mul A)。桑皮苷A在桑树中不同部位的水平差异显著,沙二根皮中的水平是其枝皮的32倍,达到23.01g/mg;湖桑32号根皮水平高达25.73g/mg,但仅高其枝皮水平2.4倍;而延边秋雨根皮桑皮苷A水平恰与其枝皮(19.03g/mg)相当,几乎没有多大差别;桑叶中都基本检测不到桑皮苷A。所以,桑根皮中桑皮苷含量普遍较高,而桑枝皮中含量差异显著,桑叶中几乎没有。100个栽培桑品种的桑枝皮桑皮苷A含量的HPLC分析显示,品种间差异十分显著,大种桑、黑油桑、睦州青和7311含量极高,其含量分别为25.47g/mg、22.01g/mg、22.28g/mg和20.11g/mg。而黄枝桑、四方唉、沙2和塘10四个桑种含量很低;含量最高与最低竟相差五、六十倍。桑皮苷A是一种氧化白藜芦醇的二葡萄糖苷,所以本试验以氧化白藜芦醇为对照,对多巴色素生成过程的影响作了较为系统的研究。结果表明桑皮苷A与氧化白藜芦醇一样,是一个真正的酪氨酸酶抑制剂,在体外通过抑制酪氨酸酶单酚酶和二酚酶的活性而抑制多巴色素的生成。本实验分别以L-酪氨酸和L-DOPA为底物,研究了桑皮苷A对蘑菇酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性的影响,结果表明,桑皮苷A具有很强的蘑菇酪氨酸酶单酚酶抑制活性,其IC50值为0.13mol/L,与氧化白藜芦醇相当(0.12mol/L),但桑皮苷A对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活性则比氧化白藜芦醇弱得多,其IC50仅为0.39mol/L。对蘑菇酪氨酸酶抑制机理分析测定的结果表明,桑皮苷A和氧化白藜芦醇对单酚酶和二酚酶都是一种可逆抑制。对蘑菇酪氨酸酶抑制类型判定结果表明,桑皮苷A和氧化白藜芦醇一样,对蘑菇酪氨酸酶这种单酚酶的抑制类型都属于混合Ⅰ型,其KI分别为29.22mol/L和92.60mol/L,KIS分别为37.70mol/L和66.20mol/L;不过,两者对二酚酶抑制类型则不同,桑皮苷A为竞争抑制,KI=1.56mol/L,而氧化白藜芦醇则为非竞争抑制,KIS=KI=2.95mol/L。本实验的研究结果为从蚕丝产业中最大的废弃的生物资源中高效提取具有多种生物活性的桑皮苷A提供了坚实的基础,对蚕桑产业中实用桑树栽培品种的培育和种植具有重要的指导意义,为蚕桑产业的循环利用与高效开发也提供了新的方向。