【摘 要】
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由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是具有急性、接触性强的一种肠道传染疾病,脱水严重、呕吐及水样腹泻作为该病的主要特征。受PED感染的仔猪的死亡率很高,导致养猪业遭受极大的经济损失。疫苗免疫是预防PED的主要方法。灭活疫苗具有高水平免疫、高稳定性、高保护率等优点
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由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是具有急性、接触性强的一种肠道传染疾病,脱水严重、呕吐及水样腹泻作为该病的主要特征。受PED感染的仔猪的死亡率很高,导致养猪业遭受极大的经济损失。疫苗免疫是预防PED的主要方法。灭活疫苗具有高水平免疫、高稳定性、高保护率等优点,但PEDV灭活苗同样有很多缺陷,如抗原递呈及加工的有效性差、生物使用率差、免疫佐剂缺乏等。安全有效的疫苗佐剂的研制及开发对PEDV灭活苗的免疫效果的提高非常重要。由于壳聚糖衍生物的高水溶性、高生物相容性及低毒性等特点,本试验研究分别用N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖（N-2-HACC）纳米粒以及N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖/N,O-羧甲基壳聚糖（N-2-HACC/CMC）纳米粒作为递送载体,包载模型抗原PEDV灭活病毒,研制PED新型灭活疫苗,并研究了该疫苗的相关性能和免疫效果。首先,本研究分别以课题组合成的天然可降解生物高分子材料N-2-HACC和N-2-HACC/CMC为原料,用课题组研制的能够控制纳米佐剂粒径大小的小型装置制备了两种纳米佐剂,并优化了其合成条件;然后,以PED灭活病毒为模型抗原,分别用以上纳米佐剂制备了两种灭活疫苗:一种是以N-2-HACC纳米粒为纳米佐剂制备的灭活疫苗（N-2-HACC/PEDV）,另一种是以N-2-HACC/CMC纳米粒为纳米佐剂制备的灭活疫苗（N-2-HACC/CMC/PEDV）;同时,本试验对以上两种PED灭活疫苗的免疫效果进行了评价,以筛选出最佳的疫苗佐剂组合;最后,我们以水相N-2-HACC、油相石油醚及液体石蜡、交联剂CMC,合成了包裹PED灭活病毒的纳米灭活疫苗（N-2-HACC/PEDV/CMC NPs）,并评价了N-2-HACC/PEDV/CMC NPs的理化特性。试验结果表明:1)试制了控制纳米佐剂粒径大小的小型装置,实现了纳米粒子粒径的可控性;2)确定了N-2-HACC纳米粒的最佳合成工艺条件,即1mg/m L N-2-HACC溶液（3m L）、1.3mg/m Lβ-GP溶液（1m L）、2.3%（w/v）Span80、油水比为14（v/v）,交联4min;3)确定了N-2-HACC/CMC纳米粒的最佳合成工艺条件,即1.7mg/m L N-2-HACC（3m L）、1.3mg/m L CMC（1m L）、3.0%（w/v）Span80、油水比为8（v/v）、交联4min;4)以PED灭活病毒为模型抗原,分别以纳米佐剂N-2-HACC纳米粒和N-2-HACC/CMC纳米粒为递送载体,制备PED灭活疫苗,结果表明,纳米佐剂N-2-HACC/CMC添加剂量为1%（w/v）时制备的N-2-HACC/CMC/PEDV免疫效果好于纳米佐剂N-2-HACC添加剂量为5%（w/v）时的N-2-HACC/PEDV,且与PEDV商品灭活苗比,两种纳米佐剂制备的PEDV灭活疫苗都达到了较长的免疫持续期;5)确定了N-2-HACC/PEDV/CMC NPs制备的最优工艺条件,即1.8mg/m LN-2-HACC（3m L）、1.6mg/m L CMC（1m L）、3.0%（w/v）Span80、1.6m LPEDV、交联4min;6)N-2-HACC/PEDV/CMC NPs包裹的PEDV保持完整,具有较好的耐酸性、耐胆汁和肠溶性,可以进行口服给药,且缓释性能也较不错。
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