【摘 要】
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第一部分 串联质谱及其在蛋白质鉴定和蛋白质组研究中的应用串联质谱法是鉴定蛋白质一级结构和进行蛋白质组研究的很重要分析方法.该文分别从两方面探索其应用.(1)在天然多肽
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第一部分 串联质谱及其在蛋白质鉴定和蛋白质组研究中的应用串联质谱法是鉴定蛋白质一级结构和进行蛋白质组研究的很重要分析方法.该文分别从两方面探索其应用.(1)在天然多肽de novo测序中的应用:采用纳喷(Nano)技术和碰撞诱导解离(CID)方法,在电喷雾-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF)上,对两种序列部分未知的天然多肽进行从头测序(de novo sequence),结果证明质谱的de novo sequence可以方便有效的解决传统的Edman降解法测序中常见的实际问题,如末位残基的丢失,赖氨酸和亮氨酸难鉴定等,此方法的建立是对Edman降解测序法很好的补充.(2)在SDS-PAGE胶内蛋白鉴定中的应用:采用毛细管HPLC与串联质谱联用对SDS-PAGE胶内的蛋白质进行分析鉴定.鼻咽癌细胞中p53相关的蛋白经免疫共沉淀提取,SDS-PAGE分离,胰蛋白酶胶内酶解,通过毛细管HPLC-电喷雾四极杆飞行时间串联质谱分析肽谱和各肽段的氨基酸序列,再根据肽谱和序列信息,提交Mascot数据库检索,结合电泳分离获得的蛋白质分子量信息,对胶内的蛋白质进行了鉴定.第二部分 敬钊缨毛蛛毒素-Ⅶ的结构与功能研究 从海南敬钊缨毛捕鸟蛛Chilobrachys jingzhao粗毒中,用离子交换层析和反相高效液相色谱分离纯化到一种新的多肽神经毒素JZTX-Ⅶ,采用Edman降解气相蛋白质测序得到JZTX-Ⅶ的一级结构是NH2-GCGTMWSPCSTEKPCCDNFSCQPAIKWCIWSP-COOH.经MALDI-TOF质谱分析,分子量为3561.13,其理论分子量为3567.17.由此可判断其六个Cys形成三对二硫键.采用RACE法克隆得到了JZTX-Ⅶ的cDNA.JZTX-Ⅶ能使小鼠的膈神经膈肌产生不可逆的兴奋作用,而且可以使蟾蜍的坐骨神经动作电位的复极化加宽.
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