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第一部分两种参数检测妊娠期糖尿病羊水板层小体的比较目的比较用自动细胞计数仪在两个参数设置下检测羊水板层小体数目(LBC),并探讨妊娠期糖尿病(GDM)对胎肺成熟度的影响。方法选择从2015.07?2016.09住院分娩的孕妇共98例,无并发症者纳入对照组(n=30),确诊为GDM者纳入GDM组(n=68)。行剖宫产术时采集羊水。使用自动细胞计数仪,设置两个参数(1?10μm、1?30μm)测定羊水LBC值并随访新生儿结局。结果(1)采用1?10μm测定时对照组、GDM组LBC值分别为(5.19±2.28)×104/μl、(3.25±1.28)×104/μl,均低于1-30μm设定之测定值(7.61±1.22)×104/μl、(6.57±1.65)×104/μl(P<0.05)。(2)采用1?10μm测定时,GDM组LBC值低于对照组(P<0.05)。采用1?30μm测定时,GDM组与对照组比较差异无统计学意义。(3)GDM组新生儿呼吸窘迫综合征(RDS)发生率高于对照组(P<0.05)。结论采用1?10μm参数测定LBC值时结果准确;GDM时LBC降低,RDS发生率增加,提示胎肺成熟度延迟。第二部分大鼠妊娠期糖尿病胰岛素治疗对胎肺成熟无促进效应目的探讨GDM大鼠模型中胎肺成熟情况、及使用胰岛素治疗对胎肺成熟度的影响。方法(1)SD大鼠在孕2.5D注射链脲佐菌素建立GDM模型。实验分为对照组、GDM组、Ins组(GDM接受人胰岛素治疗)。(2)动态监测孕鼠静脉血糖水平;孕20.5D测定孕鼠和胎鼠血浆中血糖、内源性胰岛素和外源性胰岛素。(3)光镜和透射电镜观察胎鼠肺组织结构改变。(4)钼蓝比色法测定胎肺组织总磷脂含量。结果(1)GDM组孕鼠血糖升高;Ins组孕9.5D前血糖可降至正常水平。(2)GDM组孕鼠、胎鼠血糖高于对照组和Ins组(P<0.05)。GDM组孕鼠、胎鼠内源性胰岛素低于对照组和Ins组(P<0.05)。Ins组孕鼠、胎鼠人胰岛素水平高于对照组和GDM组(P<0.05)。(3)光镜下GDM组胎鼠肺泡数目减少、肺泡腔缩小、细胞间质增厚,肺泡周围结缔组织增多;胰岛素治疗后胎肺组织形态学恢复。电镜下GDM组和Ins组胎肺组织中AECII变小,细胞内LB减少,大量糖原颗粒堆积,细胞表面的微绒毛稀疏,部分消失。(4)GDM组和Ins组胎肺中总磷脂含量低于对照组(P<0.05)。结论GDM延迟了胎肺的发育,胰岛素治疗不能促进胎肺成熟。第三部分大鼠妊娠期糖尿病胰岛素治疗对SREBP-1、SCAP、INSIG-1的影响目的探讨胰岛素治疗对GDM胎肺脂质合成的影响、及对SREBP-1、SCAP、INSIG-1表达的影响。方法(1)油红O染色检测肺泡灌洗液细胞和胎肺组织中脂质。(2)电镜观察胎肺AECII内脂质。(3)免疫组化检测SREBP-1、SCAP、INSIG-1蛋白在胎肺的表达。(4)RT-PCR检测SREBP-1、SCAP、INSIG-1 m RNA在胎肺的表达。(5)Western blot检测SREBP-1、SCAP、INSIG-1蛋白在胎肺的表达。结果(1)GDM组和Ins组肺泡灌洗液细胞中脂滴少于对照组(P<0.05),GDM组肺泡灌洗液细胞中脂滴与Ins组比较无差异。GDM组和Ins组胎肺组织中脂滴与对照组相比减少(P<0.05),GDM组胎肺组织中脂滴与Ins组相比无差异。(2)电镜观察到GDM组和Ins组AECII内脂滴消失。(3)免疫组化提示SREBP-1、SCAP、INSIG-1蛋白在GDM组胎肺组织中表达降低(P<0.05);Ins组SREBP-1表达升高(P<0.05),SCAP和INSIG-1表达仍低于对照组(P<0.05)。(4)SREBP-1、SCAP、INSIG-1 m RNA在GDM组胎肺组织中表达低于对照组(P<0.05)。Ins组SREBP-1 m RNA水平升高(P<0.05),而SCAP和INSIG-1 m RNA水平无改变。(5)SREBP-1、SCAP、INSIG-1蛋白表达在GDM胎肺组织中降低(P<0.05)。Ins组SREBP-1蛋白水平升高(P<0.05),SCAP和INSIG-1蛋白水平未升高。结论GDM胎肺中SREBP-1、SCAP、INSIG-1表达减低,胎肺脂质合成降低;胰岛素治疗后SREBP-1表达升高,但SCAP和INSIG-1仍处于低水平。第四部分胰岛素治疗未能纠正SREBP-1、SCAP和INSIG-1之间失衡目的探讨胰岛素治疗对GDM胎肺中AECII中脂质合成的影响、及对SREBP-1、SCAP、INSIG-1表达的影响。方法(1)从对照组、GDM组、Ins组原代培养AECII。(2)油红O染色检测AECII内脂质。(3)免疫组化检测SREBP-1、SCAP、INSIG-1蛋白在AECII的表达;观察SREBP-1的细胞内定位。(4)RT-PCR检测SREBP-1、SCAP、INSIG-1 m RNA在AECII内的表达。(5)Western blot检测SREBP-1、SCAP、INSIG-1蛋白在AECII内的表达。结果(1)建立了分离、纯化、原代培养AECII的方法,细胞纯度96±2%。(2)对照组AECII内有较多脂滴,GDM组和Ins组AECII内脂滴稀少。(3)对照组AECII,SREBP-1浆、核双染细胞比率较GDM组和Ins组高(P<0.05),GDM组和Ins组无差异。除SREBP-1蛋白在Ins组AECII中表达升高外(P<0.05),其余蛋白在GDM组、Ins组AECII中均降低(P<0.05)。(4)GDM组AECII中SREBP-1、SCAP、INSIG-1 m RNA和蛋白均降低(P<0.05)。Ins组AECII中SREBP-1 m RNA和蛋白均升高(P<0.05),SCAP、INSIG-1 m RNA和蛋白仍低于对照组(P<0.05)。结论胰岛素治疗使SREBP表达升高,但不能纠正SREBP-1、SCAP、INSIG-1间的失衡,成熟的SREBP不能入核,最终仍不能增加胎肺脂质合成。