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血水草Eomecon chionantha Hance)是罂粟科(Papaveraceae)白屈菜族(Chelidonium)血水草属(Eomecon)多年生野生草本植物,为我国特有的单属、种植物,资源丰富,具有多种药理作用。已证实从血水草根及根茎中提取的生物碱(Eomecon chionantha alkaloids, ECA)有较好的杀灭钉螺作用,是一种具有开发前景的植物杀螺剂。进行ECA灭螺的机理研究将为血水草作为植物杀螺剂的应用提供科学依据。本研究是国家自然科学基金及长沙市科技局项目的部分研究内容。以钉螺肝脏为样本,探讨ECA杀螺机理。实验依照WHO规定的“杀螺剂实验室终筛方法”的浸泡法,分别用10mg/L ECA和清水浸泡钉螺36h,解剖活螺,分离肝脏：①测定钉螺肝脏总蛋白质和糖原含量,丙二醛(MDA)水平,丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性；②建立针对钉螺肝脏蛋白质组阵列分离的双向电泳方法,分离钉螺肝脏蛋白质,筛选差异蛋白质点,并予质谱鉴定；③提取肝细胞DNA,进行DNA琼脂糖凝胶电泳；④捣碎肝组织,获取肝细胞悬液,经流式细胞术分析ECA诱导钉螺肝细胞凋亡的状况。研究获得了如下主要结果：(1)ECA浸泡后钉螺肝脏总蛋白质和糖原含量均显著降低,AKP、ALT、AST、LDH酶活性明显下降,与清水对照组相比,均存在显著性差异(P<0.05)；而ACP及MDA的活性差异不具有显著性(P>0.05)。(2)成功建立了钉螺肝脏蛋白质双向电泳方法,获得了分辨率高、重复性好的双向电泳图谱,经ImageMaster 2D 5.0软件分析,ECA处理组和清水对照组分别检测到354±10个和311±12个蛋白质点(n=3)；质谱鉴定获得假定蛋白、ENSANGP00000022175蛋白、醛脱氢酶、未知蛋白、ENSANGP00000027067蛋白、类似锚蛋白3的1亚型4亚亚型蛋白、相似A型肝炎病毒短型细胞受体1的蛋白、线粒体异柠檬酸脱氢酶2样蛋白、类似角蛋白的蛋白、角蛋白10、角蛋白1共11个蛋白质点,这些蛋白质均为ECA处理后表达上调的蛋白质。(3)ECA处理后钉螺肝细胞DNA琼脂糖凝胶电泳未观察到典型DNA Ladder图谱；经流式细胞仪检测ECA处理组和清水对照组的钉螺肝细胞早期凋亡细胞率分别为13.77%与13.70%；晚期凋亡细胞率分别为10.74%与10.62%；则总凋亡率分别为24.51%和24.32%,差异无统计学意义(P>0.05)。从以上研究结果得出如下结论：(1)ECA抑制钉螺肝脏AKP、ALT、AST、LDH酶活性,影响钉螺肝脏糖及蛋白质代谢,破坏代谢平衡,导致肝功能紊乱是钉螺死亡的重要原因之一。(2)成功建立了钉螺肝脏蛋白质双向电泳条件。(3)ECA作用后钉螺肝脏蛋白质表达发生改变。成功鉴定的11个差异蛋白质点,为进一步研究ECA对钉螺肝脏的损伤机理提供了重要线索。(4)初步证实细胞凋亡不是ECA诱导钉螺肝细胞死亡的主要途径。