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目的：筛选有效干扰HOXA10基因表达的特异性小干扰RNA (small interference, siRNA)序列并鉴定其功能,据此构建靶向同源盒(homeobox, HOX)A1O的shRNA真核表达载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10,探讨利用RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术沉默HOXA10基因对人慢性髓系白血病株K562增殖、凋亡及耐药的影响。方法：1.设计合成3对针对HOXA10基因不同位点的siRNA序列,阳离子脂质体介导转染人肺腺癌A549细胞,RT-PCR法检测HOXA10mRNA表达,筛选出沉默HOXA10效果最佳的siRNA序列。应用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT)、流式细胞术分别检测该siRNA对A549细胞增殖和凋亡的影响。2.根据筛选出的针对HOXA10的特异性有效siRNA序列设计合成短发卡(short hairpin, shRNA)寡核苷酸链,构建pGPHI/GFP/Neo-HOXA10的shRNA真核表达载体。3.靶向HOXA10的真核表的载体分别瞬时及稳定转染K562细胞,并联合化疗药物作用于K562细胞,RT-PCR检测HOXA10mRNA表达,MTT法检测细胞的增殖能力及其对化疗药物敏感性的变化,Hochest33258染色、流式细胞术检测细胞凋亡。结果：1.3对siRNA均能抑制HOXA10的表达,其中siRNA1抑制HOXA10mRNA的表达最为明显HOXA10/β-actin相对表达量ODR=(20.19±1.70)%; siRNA1对A549细胞的增殖抑制率可达(69.79±2.09)%；诱导凋亡率为(29.59±2.67)%。2.构建pGPHI/GFP/Neo-HOXA10载体并进行酶切鉴定及测序,显示载体构建成功。3.该载体瞬时转染K562细胞,能有效降低HOXA10mRNA表达水平ODR=(38.86±4.49)%；其对K562细胞增殖抑制率IR=(66.30±1.26)%,促进凋亡率可达(22.29±1.67)%,与对照组相比均有有统计学意义(P<0.05),且联合小剂量阿糖胞苷(Ara-C)后,此作用明显增强。该载体稳定转染的K562细胞对长春新碱(VCR)及足叶乙甙(VP16)的敏感性明显增强,半数抑制浓度(IC50)明显低于对照组(P<0.05)；且稳转细胞联合化疗药物后出现明显的凋亡形态改变,且凋亡率显著增加(P<0.05)。结论：1.本研究筛选出的siRNA1序列可有效沉默HOXA10基因的表达,有效抑制A549细胞增殖、促进其凋亡。2.成功构建靶向HOXA10的shRNA真核表达载体pGPHI/GFP/Neo-HOXA10.3.RNA干扰HOXA10基因表达有效抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,能提高K562细胞对VCR、VP16的敏感性,在一定程度上逆转白血病多药耐药(MDR)。