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背景自身免疫性肝炎(AIH)是一种以高丙球蛋白血症、血清自身抗体增高为特征性的肝炎。AIH依据自身抗体性质可被分为1型和2型两种。1型AIH以血清抗核抗体和/或抗平滑肌抗体增高为主 2型则以抗肝肾微粒体1型抗体(anti-LKMl)为主,且后者多发生于2-14岁儿童。AIH发生机制目前并不明确,学者一直认为与遗传因素、环境因素、病毒感染及自身免疫功能紊乱有关。多种因素引起机体固有免疫及适应性免疫应答增强,进一步引起肝脏组织损伤。其中,调节性T细胞/辅助性T细胞17的平衡破坏在AIH疾病发生发展中起重要作用。Treg细胞在AIH患者外周血比例减少,且分泌较少具有负性调节作用的细胞因子IL-10。慢性肝脏疾病患者多出现钙-甲状旁腺素-维生素D轴功能紊乱。AIH患者多出现维生素D缺乏。目前,基因组学研究可为发现连接维生素D和AIH发病的功能性蛋白提供依据,这类蛋白包括主要组织相容性抗原2型分子(MHCII)、维生素D受体(VDR)、Toll样受体(TLR)、细胞毒素T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)、细胞色素P450、调节性T细胞及可调控其功能的转录调控因子3(Foxp3)等。维生素D可影响多种免疫细胞功能,如B细胞、T细胞等。AIH患者外周血Treg细胞减少与维生素D缺陷是否有关,且相互影响的机制如何尚未见文献报道。本课题拟采用流式、酶联免疫等技术,分析AIH患者外周血Treg细胞比例、IL-10含量与维生素D间的关系,并在体外条件下探讨维生素D对Treg细胞分化的影响。目的本课题拟通过实验明确AIH患者Treg细胞比例以及其与维生素D的相关关系;证明维生素D对AIH患者Treg细胞分化有促进作用,从而揭示维生素D的缺乏是通过抑制Treg细胞分化来参与AIH疾病的发生发展。方法1.研究对象:参照2010年美国肝病学会自身免疫性肝炎诊断标准,选择本医院收治的AIH患者30例。对照组为同期该院体检健康人群(Health control,HC)18例,注意尽量保证年龄、性别相匹配。2.样本收集和处理:收集AIH患者和HC对照者空腹血样10ml,以肝素锂抗凝,分离血浆冻存,并采用Ficoll分离法分离外周血单个核细胞,备用。3.血浆维生素D检测:采用全自动生化仪检测AIH和HC血浆维生素D含量。4.血浆IL-10水平的检测:采用人IL-10ELISA检测试剂盒,检测血浆IL-10含量。5.CD4+CD25+Foxp3+IL-10+Treg细胞比例检测:采用多色荧光抗体结合流式细胞术检测并分析样本中CD4+CD25+Foxp3+IL-10+Treg细胞比例。6.统计学方法:计量数据以均数加减标准差(X+S)表示,两组间差异比较采用t检验,各组数据阳性率比较采用卡方检验,相关性采用pearson相关分析。检验水准a=0.05,P<0.05为差异有统计学意。结果1.AIH患者组血浆25-(OH)-D3含量为(38.65±5.38)nmol/L,健康对照者血浆25-(OH)-D3含量为(61.43±14.90)nmol/L,前者低于后者,且有显著统计学差异(P=0.014)。2.AIH患者外周血IL-10含量为(33.43±6.50)pg/ml,低于健康对照者(57.51±12.68)pg/ml,且有显著统计学差异(P<0.001);AIH患者外周血单个核细胞给予PMA刺激,在有l,25-(OH)2-D3的条件下,上清IL-10含量为(57.26±20.20)pg/ml,无l,25-(OH)2-D3的条件下,上清IL-10含量为(19.99±6.72)pg/ml,两组比较均有统计学差异。3.外周血25-(OH)-D3与IL-10及CD4+CD25+Foxp3+IL-10+T细胞比例均有相关性(R2=0.379,P=0.0003;R2=0.151,P=0.0341)。4.AIH患者外周血经PMA刺激后,CD4+CD25+Foxp3+IL-10+T细胞比例为(5.09±1.50)%,与HC对照组(10.08±4.03)%相比较,比例明显降低,且有统计学差异;AIH患者外周血单个核细胞给予PMA刺激,在有l,25-(OH)2-D3的条件下,CD4+CD25+Foxp3+IL-10+T 细胞为(12.05±4.59)%,在无l,25-(OH)2-D3 的条件下,CD4+CD25+Foxp3+IL-I0+T细胞为(5.54±2.17)%。结论1.AIH患者外周血Treg细胞比例及IL-10含量减少可能由维生素D缺乏引起;2.维生素D可促进AIH患者Treg细胞分化,并刺激Treg细胞分泌IL-10,在一定程度上揭示维生素D缺乏是通过抑制Treg细胞分化来参与AIH疾病发生发展。