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目的:利用原子力显微技术(AFM)研究原代培养的海马神经元和神经胶质细胞表面超微结构及相互间的连接结构。
材料和方法:取新生12小时以内的Wistar大乳鼠,在无菌条件下原代培养海马神经元和神经胶质细胞。选择生长良好的海马神经元和胶质细胞用2.5%的戊二醛(生理盐水配制)固定30min,然后用流动三蒸水轻轻冲洗样品,以去除样品表面的盐结晶。把培养皿剪成合适大小,用双面胶固定于基底上,待其在空气中自然干燥后,置于AFM的扫描器上,进行扫描成像,成像模式为大气环境下的接触模式(Contact Mode)。
结果:本实验中培养的海马神经元和神经胶质细胞生长状态良好。利用AFM观察显示:(1)正常海马神经元表面光滑,起伏均匀、规律,神经元多为单个生长,突起之间交织成网,相互间有突触形成。海马神经元可被胞体上水平的凹沟分为上中下三部分或上下两部分,神经突起均自胞体上部发出,而没有从下部发出者。同时,我们还观察到海马神经元间存在膜性连接以及长程非突触性突起连接结构;(2)神经胶质细胞平铺于培养皿的底部,胞体形状不规则,表面较扁平,高度平均为780nm,绝不会超过1μm。突起丰富,但没有极性,无轴突树突之分,还观察到两胶质细胞间存在长程纤维管状连接结构。
结论:在以往的工作中利用AFM观察到海马神经元和胶质细胞表面一些利用其它显微技术难以发现的超微结构,还发现了一些用突触结构难以解释的连接结构:
(1)再次证明原子力显微技术是研究细胞表面超微结构的有用工具;
(2)神经元和胶质细胞在原子力显微镜下具有明显的形态学差异,神经元表面饱满光滑,高度至少在2μm以上。胞体具有明显的极性,其一端较大,树突从此端发出,另一端较小,轴突从此端发出;突起发育到一定程度,其极性清晰可辨,有轴突树突之分。海马神经元可被胞体上水平的凹沟分为上中下三部分或上下两部分,神经突起均自胞体上部发出,而没有从下部发出者;胶质细胞表面较为扁平,高度平均为780nm,绝不会超过1μm。其突起较为丰富,但没有极性,无轴突、树突之分;
(3)发现了神经元间的膜性和长程非突触性突起连接;
(4)神经胶质细胞间的长程纤维管状连接。