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一、耗竭性T细胞在急性髓系白血病中的表达变化及临床意义的研究目的:为了探究急性髓系白血病(AML)患者在不同的疾病状态下耗竭性T细胞及免疫检查点的表达水平。方法:自2018年1月至2019年2月共检测144例AML患者的外周血(PB)标本和54例骨髓(BM)标本,其中包括初诊时的57例PB标本和20例BM标本,处于完全缓解(CR)时的47例PB标本和10例BM标本,处于未缓解状态下(NR)的28例PB标本和12例BM标本以及复发时的12例PB标本和12例BM标本。本研究同时还检测了42例健康人PB标本和6例BM标本作为对照组。运用流式细胞术分别检测外周血及骨髓中CD4+PD1+TIM-3+T细胞和 CD8+PD1+TIM-3+T细胞的数量,CD4+和 CD8+T细胞表面PD1、TIM-3、LAG-3表达量。通过体外培养并刺激PB及BM中单个核细胞,我们检测了CD4+PD1+、CD8+PD1+、CD4+TIM-3+和CD8+TIM-3+T细胞中IL-2和IFN-γ的分泌量。结果:1.初诊AML、NR及复发患者与健康人相比,无论PB还是BM都检测到较高水平的PD1+TIM-3+T细胞,CR的患者体内PD1+TIM-3+T细胞明显减低。初诊和复发时BM中CD4+PD1+TIM-3+T细胞和CD8+PD1+TIM-3+T细胞的数量高于PB。初诊时PB和BM中 CD8+PD1+TIM-3+T细胞的数量高于 CD4+PD1+TIM-3+T细胞。2.初诊时AML患者PB及BM中T细胞上的PD1表达量均明显高于健康人,CD8+T细胞表面的PD1表达水平比CD4+T细胞较高。BM中T细胞上的PD1表达量高于PB。获得CR的AML患者PB中CD4+和CD8+T细胞和及BM中CD8+T细胞表面PD1表达量明显低于初治AML患者,两组之间存在统计学差异(P=0.02,<0.001,0.006)。初诊AML患者PB中CD4+和CD8+T细胞表面的TIM-3的表达水平与CR患者相比有着明显的统计学差异(P=0.031,0.015)。3.获得CR的患者PB中CD8+T细胞上LAG-3与NR患者之间表达量的差异有统计学意义(P=0.005)。结论:(1)初诊的AML患者PB和BM中PD1+TIM-3+T细胞水平明显高于健康人,CR患者体内的PD1+TIM-3+T细胞数量减少。在AML的疾病发生中CD8+T细胞发生耗竭的程度更加严重,抗白血病能力明显受损。(2)初诊的AML患者BM中T细胞的耗竭程度较外周血更为严重。(3)初诊和复发的AML患者PB和BM中T细胞表面的PD1表达量明显高于健康人,PD1的表达上调与AML的发生以及疾病进展有关。二、耗竭性T细胞在急性淋巴细胞白血病中的表达变化及临床意义的研究目的:为了探究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者在不同的疾病状态下耗竭性T细胞及免疫检查点的表达水平。方法:自2018年1月至2019年2月共检测63例ALL患者的PB标本和19例BM标本,其中包括初诊时的18例PB标本和9例BM标本,处于CR时的16例PB标本和3例BM标本,处于NR的14例PB标本和2例BM标本以及复发时的14例PB标本和5例BM标本。同时还检测了 42例健康人PB标本和6例BM标本作为对照组。运用流式细胞术分别检测外周血及骨髓中CD4+PD1+TIM-3+T细胞和CD8+PD1+TIM-3+T细胞的数量,CD4+和CD8+T细胞表面PD1、TIM-3、LAG-3表达量。通过体外培养并刺激PB及BM中单个核细胞,我们检测了CD4+PD1+、CD8+PD1+、CD4+TIM-3+和CD8+TIM-3+T细胞中IL-2和IFN-y的分泌量。结果:1.在初诊ALL、NR及复发患者PB和BM都检测到较高水平的PD1+TIM-3+T细胞,治疗后CR的患者体内PD1+TIM-3+T细胞数量减少,但仍高于健康人。CR患者外周血CD4+PD1+TIM-3+T细胞数量明显低于初诊ALL、NR及复发患者(P值均<0.001)。初诊ALL患者骨髓中PD 1+TIM-3+T细胞的数量高于外周血,骨髓和外周血中CD8+PD1+TIM-3+T细胞数量都稍高于CD4+PD1+TIM-3+T细胞。复发患者外周血中可见明显增多的CD8+PD1+TIM-3+T细胞。2.初诊ALL、CR、NR及复发患者外周血中CD4+T细胞表面的PD1表达量明显高于健康人。获得CR的ALL患者外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞表面PD1表达量明显低于初治ALL患者,两组之间存在显著的统计学差异(P<0.001)。初诊ALL患者外周血中CD8+T细胞表面的TIM-3的表达水平明显高于CR患者,两组相比有统计学差异(P=0.036)。3.初诊ALL患者PB中CD4+T细胞和CD8+T细胞表面的LAG-3的表达水平与健康人和CR患者相比较高,但是组间差异均没有统计学意义。结论:(1)初诊的ALL患者PB和BM中PD1+TIM-3+T细胞水平明显高于健康人,CR患者PB中CD4+PD1+TIM-3+T细胞数量明显减少。(2)初诊ALL患者BM中T细胞耗竭程度比外周血更严重。(3)PB中CD8+PD1+TIM-3+T细胞水平与ALL的疾病进展相关。(4)初诊的ALL患者PB中T细胞表面的PD1和TIM-3表达量明显增高,可能与ALL的发生有关。