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远端缺血预处理(Remote ischemia preconditioning RIPC)和远端缺血后处理(Remote ischemia postconditioning RIPO)是指通过对远端器官进行缺血的预处理(后处理)减轻靶器官缺血再灌注损伤的一种保护措施。相应的脾缺血预处理(Spleen ischemia preconditioning, sIPC)和脾缺血后处理(Spleen ischemia postconditioning, sIPO)指通过脾脏的缺血预处理或后处理以期达到保护缺血再灌注器官的目的的一种缺血处理策略。目前仅有少数研究针对脾脏缺血预处理和后处理的保护作用,且对其机制研究甚少,本研究将探讨脾脏缺血处理对大鼠缺血再灌注肾的保护作用及相应的机制。第一部分脾缺血处理对大鼠缺血再灌注急性肾损伤的保护作用目的：探讨脾脏缺血处理是否对大鼠肾脏缺血再灌注急性损伤有保护作用方法：随机将24只成年雄性SD大鼠分为四组：(1)假手术(sham)组：麻醉后行打开腹腔。于肝脏下方,腹膜后找到右侧肾脏,游历肾蒂周围组织后,明确肾蒂血管及输尿管后,双线结扎肾蒂,输尿管,切除右肾,清洗腹腔后,查无活动性出血后,关腹；(2)肾缺血再灌注(IR)组：与假手术组相同的处理方式切除右侧肾脏后,于左侧腹膜后将左侧肾脏肾蒂分离,用血管夹夹闭左肾血管,阻断血流45min后松开血管夹,之后处理同假手术组；(3)脾缺血预处理(sIPC)组：打开腹腔后,以相同的方法切除右侧肾脏后,血管夹夹闭脾蒂,阻断脾供血5min,松开血管夹,恢复血流5min后再次夹闭,重复缺血循环3次,再行左肾缺血再灌注处理,处理方式同IR组；(4)脾缺血后处理(sIPO)组：与假手术组相同的处理方式切除右侧肾脏后,左肾进行缺血处理45min,之后脾脏以sIPC组方式进行缺血循环处理。术后1天取大鼠静脉血和左肾组织。将大鼠静脉血以3000r/min离心10min后取上层血清,用试剂盒检测大鼠血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)的水平。将大鼠肾组织固定后石蜡包埋行苏木索-伊红(HE)染色,并观察肾脏的病理损伤情况,进行半定量病理学评分。结果：与sham组相比,IR组大鼠术后1天血清Cr和BUN水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),脾缺血处理组(sIPC,sIPO)血清Cr和BUN水平相比于IR组有显著下降,差异有统计学意义(P<0.05), sIPC,sIPO组间血清Cr和BUN水平相互比较未见明显差异(P>0.05)。Sham组HE染色结果肾脏组织结构正常,肾小管上皮细胞未见明显坏死；IR组肾小管结构破坏明显,肾小管上皮细胞可见明显肿胀,坏死,脱落,炎性细胞浸润；sIPC,sIPO组肾小管上皮细胞轻度肿胀,坏死不明显,可见少量炎性细胞浸润。半定量评分结果显示：R组肾病理组织评分明显高于sham组(P<0.05),差异具有统计学意义；脾缺血处理组肾组织病理学评分明显低于IR组(P<0.05)sIPC,sIPO组间肾脏病理组织损伤评分差异未见统计学差异(P>0.05)。结论：脾缺血处理能减轻肾脏缺血再灌注急性损伤,预处理与后处理脾缺血处理方式对肾脏缺血再灌注损伤保护作用没有明显差异。第二部分脾缺血处理对肾缺血再灌注损伤保护作用机制的分析目的：探讨脾缺血处理减轻肾缺血再灌注损伤的炎性机制方法：随机将24只成年雄性SD大鼠分为四组：(1)假手术(sham)组：麻醉后行打开腹腔。于肝脏下方,腹膜后找到右侧肾脏,游历肾蒂周围组织后,明确肾蒂血管及输尿管后,双线结扎肾蒂,输尿管,切除右肾,‘清洗腹腔后,查无活动性出血后,关腹；(2)肾缺血再灌注(IR)组：与假手术组相同的处理方式切除右侧肾脏后,于左侧腹膜后将左侧肾脏肾蒂分离,用血管夹夹闭左肾血管,阻断血流45mmin后松开血管夹,之后处理同假手术组；(3)脾缺血预处理(sIPC)组：打开腹腔后,以相同的方法切除右侧肾脏后,血管夹夹闭脾蒂,阻断脾供血5min,松开血管夹,恢复血流5min后再次夹闭,重复缺血循环3次,再行左肾缺血再灌注处理,处理方式同IR组；(4)脾缺血后处理(sIPO)组：与假手术组相同的处理方式切除右侧肾脏后,左肾进行缺血处理45mmin,之后脾脏以sIPC组方式进行缺血循环处理。术后1天取大鼠静脉血和左肾组织。将大鼠静脉血以3000r/min离心10min后取上层血清,使用ELISA试剂盒检测大鼠血清TNF-α, IL-6.IL-10水平,利用免疫组织化学染色和Western Blot检测大鼠肾脏内TNF-α, IL-6, IL-10的表达水平和分布情况。结果：IR组大鼠术后1天血清TNF-α和IL-6水平明显高于sham组,差异有统计学意义(P<0.05), sIPC,sIPO组与IR组相比较血清TNF-α和IL-6水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.05), sIPC,sIPO组间血清TNF-α和IL-6水平无明显差异(P>0.05), sIPC,sIPO组血清IL-10水平高于sham组和IR组,差异有统计学意义(P<0.05)。IHC结果显示IR组肾组织TNF-α和IL-6表达水平增高,IL-10在两组脾缺血处理组中表达增强。Western blot结果显示sIPC,sIPO组TNF-α和IL-6表达低于IR组(P<0.05),而两种脾缺血处理组IL-10的表达水平高于IR组(P<0.05)。结论：脾缺血处理可以通过调控细胞因子表达抑制炎症反应减轻肾缺血再灌注损伤。第三部分 脾缺血处理抑炎作用的具体通路机制的分析与探讨目的：探讨脾缺血处理抑制大鼠炎症反应的机制方法：随机将24只成年雄性SD大鼠分为四组：(1)假手术(sham)组：麻醉后行打开腹腔。于肝脏下方,腹膜后找到右侧肾脏,游历肾蒂周围组织后,明确肾蒂血管及输尿管后,双线结扎肾蒂,输尿管,切除右肾,清洗腹腔后,查无活动性出血后,关腹；(2)肾缺血再灌注(IR)组：与假手术组相同的处理方式切除右侧肾脏后,于左侧腹膜后将左侧肾脏肾蒂分离,用血管夹夹闭左肾血管,阻断血流45mmin后松开血管夹,之后处理同假手术组；(3)脾缺血预处理(sIPC)组：打开腹腔后,以相同的方法切除右侧肾脏后,血管夹夹闭脾蒂,阻断脾供血5min,松开血管夹,恢复血流5min后再次夹闭,重复缺血循环3次,再行左肾缺血再灌注处理,处理方式同R组；(4)脾缺血后处理(sIPO)组：与假手术组相同的处理方式切除右侧肾脏后,左肾进行缺血处理45min,之后脾脏以sIPC组方式进行缺血循环处理。术后1天取大鼠静脉血和左肾组织。免疫组织化学和Western blot检测大鼠肾组织内IKK-β, NF-κb p50以及核内NF-κb p65的表达水平。取大鼠静脉血后,加入红细胞裂解液后弃上清,重悬细胞,进行CD3CD4双标流式细胞分析。结果：相比于IR组,sIPC,sIPO两组肾组织内IKK-p和NF-κb p50的表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组间IKK-p和NF-κb p50的表达水平没有明显差异(P>0.05)。核内NF-κb p65的表达水平IR组明显高于sham组(P<0.05),而sIPC,sIPO两组核内NF-κb p65水平明显降低(P<0.05)。细胞流式分析结果提示：sIPC,sIPO组外周血CD3+细胞和CD3+CD4+细胞比例明显升高(P<0.05),相比于sIPC组,sIPO组CD3+细胞和CD3+CD4+细胞比例升高更明显(P<0.05)。结论：脾缺血处理能够通过下调IKK—NF-κb通路的表达抑制炎症反应并且影响免疫细胞分化以及表型从而影响相应的免疫功能。