【摘 要】
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该研究中,通过PCR方法获得Ser123→Glu突变体外壳蛋白及野生外壳蛋白的基因,经序列分析验证后插入植物双元载体pE3,将含有该重组质粒的土壤农杆菌转化烟草.转化烟草的Souther
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该研究中,通过PCR方法获得Ser123→Glu突变体外壳蛋白及野生外壳蛋白的基因,经序列分析验证后插入植物双元载体pE3,将含有该重组质粒的土壤农杆菌转化烟草.转化烟草的Southern杂交结果表明外源基因已整合到宿主的染色体中;Western杂交结果证明外壳蛋白在转化烟草中获得了稳定表达.进一步对F1代转基因烟草作Western检测以确定转化基因的分离及外壳蛋白的平均表达含量.对外壳蛋白表达阳性的转基因植株接种不同浓度的TMW,确定表达野生物及外壳蛋白突变体的转基因烟草对TMW的抗性.攻毒结果表明,在表达水平一致的情况下,外壳蛋白突变体基因赋予转基因烟草以更强的抗性.对外壳蛋白突变体的性质研究表明,突变Ser123→Glu对外壳蛋白的可溶性及在转基因植株中的聚集状态无显著影响.该实验对外壳蛋白突变体的研究进一步证明了外壳蛋白介导抗生的动态平衡假说,即内源外壳蛋白的表达通过与表达粒子外壳蛋白的交换抑制表达粒子的脱衣壳过程;暗示了外壳蛋白形成聚合体结构是转基因植物体抗性的前提.
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